枯草芽孢桿菌araR基因缺陷株的構(gòu)建.pdf

1、目前工業(yè)發(fā)酵原料主要來(lái)自玉米淀粉糖，隨著工業(yè)發(fā)酵規(guī)模的日益擴(kuò)大，與人爭(zhēng)糧與糧爭(zhēng)地的現(xiàn)象日益嚴(yán)重。利用木質(zhì)纖維素作為工業(yè)發(fā)酵的碳源，已成為技術(shù)發(fā)展趨勢(shì)。木糖是木質(zhì)纖維素水解產(chǎn)物的主要成分，但是大多數(shù)工業(yè)微生物不能利用木糖，或者不能有效利用木糖，這是木質(zhì)纖維素作為工業(yè)發(fā)酵原料急需解決的問(wèn)題之一?？莶菅挎邨U菌是重要的工業(yè)發(fā)酵菌種，其固有的木糖吸收調(diào)節(jié)機(jī)制使其不能利用木糖作為唯一碳源；其存在的糖分解代謝物阻遏機(jī)制使葡萄糖的存在抑制細(xì)胞對(duì)木糖的利

2、用。如果使枯草芽孢桿菌能夠利用木質(zhì)纖維素水解產(chǎn)物作為碳源進(jìn)行工業(yè)發(fā)酵，則必需對(duì)其進(jìn)行遺傳改造。
　　 本文根據(jù)枯草芽孢桿菌木糖運(yùn)輸?shù)恼{(diào)控機(jī)制，設(shè)計(jì)了敲除阻遏蛋白編碼基因araR，使木糖運(yùn)輸?shù)鞍拙幋a基因araE組成型表達(dá)，而改善細(xì)胞木糖吸收能力的方案。采用兩步重疊PCR方法，拼接了帶有紅霉素抗性基因的同源重組片段Au-E-Ap，并通過(guò)TA克隆構(gòu)建了重組質(zhì)粒；經(jīng)spizizen轉(zhuǎn)化枯草芽孢桿菌168，篩選得到了紅霉素抗性轉(zhuǎn)化子；經(jīng)P