枯草芽孢桿菌脂肽類物質(zhì)的分離純化鑒定與應用研究.pdf

1、枯草芽孢桿菌屬于芽孢桿菌中的一屬，在農(nóng)業(yè)、環(huán)境治理、醫(yī)學、食品和洗滌化學業(yè)中有著廣泛的應用。
　　本研究從枯草芽孢桿菌菌株（B.subtilis）培養(yǎng)液中通過鹽酸沉淀法，后用甲醇萃取，正己烷洗脫得到了一類脂肽類物質(zhì),平板測定顯示脂肽提取物對棉花黃萎病致病菌大麗輪枝菌具有顯著地抑菌效果，其抑菌效果超過了9.5％的克黃枯，相對防效達到了85.4％。
　　對分離得到的脂肽類物質(zhì)進行制備型HPLC分離后得到了surfactin，與生

2、物表面活性素surfactin標準品出峰保留時間一致，且經(jīng)TLC茚三酮實驗后發(fā)現(xiàn)為環(huán)肽，經(jīng)表面張力儀測定其水溶液的表面張力發(fā)現(xiàn)可有效降低溶液表面張力，其臨界膠束濃度CMC經(jīng)測定為30 mg/L因此初步判斷其為surfactin。對其進行進一步質(zhì)譜發(fā)現(xiàn)，其電噴霧質(zhì)譜得到的[M+H]+值分別為m/z1007.0、1021.0、1035.0，與surfactin標準品的三種同系物結(jié)果一致，其相差值皆為14D，預測可能為亞甲基(-CH2)。

3、r>　　在脂肪酶催化降解油脂的過程中添加surfactin，比較其對脂肪酶催化能力的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在催化豆油，Tris-HCl緩沖液pH7.5條件下，酶濃度1％，溫度35℃，脂肪酶達到最大活性所需的BP-1最小添加量為400μL(2 mg/mL)。催化效率提高了43.1％，酶活達到了98 U/g，相較于化學表面活性劑（SDS、季銨、吐溫-20），對反應后的產(chǎn)物進行甲酯化后進氣相色譜檢測，發(fā)現(xiàn)產(chǎn)物中的組分含量提高了123.8％。
　

4、　在對β-葡萄糖苷酶催化合成紅景天苷的研究顯示，在添加surfactin的情況下，紅景天苷的收率達到59.2％，相較于其他化學合成型表面活性劑，surfactin對β-葡萄糖苷酶的活性影響最大。證明surfactin可以有效地提高其酶活。
　　結(jié)果顯示從枯草芽孢桿菌發(fā)酵液中分離純化得到的脂肽類化合物中包含surfactin，其對脂肪酶及β-葡萄糖苷酶的催化活性有著顯著地提高，對于擴大脂肪酶的工業(yè)應用與β-葡萄糖苷酶催化合成紅景天苷