羅氏沼蝦諾達(dá)病毒單克隆抗體的制備及應(yīng)用.pdf

1、羅氏沼蝦肌肉白濁病的病原是羅氏沼蝦諾達(dá)病毒。羅氏沼蝦諾達(dá)病毒粒子呈廿面體，無(wú)囊膜，大小為23～25nm，病毒核酸為單鏈RNA，由2個(gè)片段組成，RNA-1和RNA-2，分別為3.0kb和1.3kb。MrNV為首個(gè)從甲殼類中分離到的諾達(dá)病毒?！　∮锰峒兊腗rNV免疫BALB/c小鼠，取小鼠脾細(xì)胞與SP2/0鼠骨髓瘤細(xì)胞融合，得到12株能特異分泌抗MrNV的單克隆抗體(monoclonalantibody，Mab)的雜交瘤細(xì)胞。注射小鼠，制

2、備腹水單克隆抗體，ELISA效價(jià)為1：105～106。亞型鑒定結(jié)果表明，有6株單抗為IgG1型，4株單抗為IgG2a型，2株單抗為IgG2b型。12株單抗與對(duì)蝦白斑綜合癥病毒(WSSV)和對(duì)蝦桃拉綜合癥病毒(TSV)均無(wú)交叉反應(yīng)。Westernbolt分析表明，小鼠單抗2B5能與MrNV43kD的外膜蛋白特異性結(jié)合。　　制備MrNV兔抗血清，挑選效價(jià)高的腹水單抗2B5，建立了檢測(cè)羅氏沼蝦諾達(dá)病毒的三抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(thre

3、eantibodiessandwich-ELISATAS-ELISA)，TAS-ELISA最適反應(yīng)條件為：兔抗體以1μg/mL包板，小鼠單抗2B5的工作濃度為1：50，000，該法檢測(cè)MrNV的靈敏度達(dá)0.98ng。通過(guò)對(duì)病蝦及疑似病蝦的病毒檢測(cè)，表明TAS-ELISA法比間接ELISA法、核酸電泳法有更高的陽(yáng)性檢出率和符合率；此外還摸索了降低病毒測(cè)定孵育溫度和縮短孵育時(shí)間對(duì)病毒檢測(cè)的影響，表明各步孵育溫度和時(shí)間分別為25℃和20min