I型鴨肝炎病毒單克隆抗體的制備.pdf

1、鴨病毒性肝炎(Duck Viral Hepatitis,DVH)是由鴨肝炎病毒(Duck Hepatitis Virus)引起的以侵害雛鴨為主的高死亡率的烈性傳染病。DHV有三個(gè)型,分別命名為DHV-1、DHV-2和DHV-3,三個(gè)型之間沒(méi)有抗原交叉性。其中以傳統(tǒng)1型DHV分布最廣泛,對(duì)3周齡內(nèi)的雛鴨致死率高達(dá)90％以上。目前,2型和3型DHV只在中國(guó)、英國(guó)和美國(guó)有相關(guān)報(bào)道,但致死率較低。目前我國(guó)較為流行的DHV屬于1型DHV(DHV-

2、1A)。DHV-1屬于小RNA病毒科,小RNA病毒屬,是單股正鏈RNA病毒。該病毒顆粒比較小,大小只有20 mm左右。本研究將DHV-1進(jìn)行增殖和純化,利用純化的DHV-1免疫小鼠,最終制備出10株抗DHV-1的單克隆抗體。
　　 本實(shí)驗(yàn)將DHV-1接種雞胚,收取24 h～96 h死亡雞胚的尿囊液。經(jīng)過(guò)氯仿抽提后將病毒用PEG-6000進(jìn)行濃縮,濃縮后的病毒懸液以5×104×g的速度進(jìn)行離心16 h。將純化的DHV-1免疫6周齡

3、的BALB／c雌鼠,取小鼠的脾細(xì)胞和SP2／0骨髓瘤細(xì)胞在PEG-1450的作用下融合。利用間接ELISA方法進(jìn)行篩選和三次亞克隆,最終得到10株抗DHV-1的單克隆抗體,分別命名為AF8(線性)、BD6(線性)、AF2、AF3、AD4、AE2、AG1、DB6(線性)、BG6和DH11。并對(duì)該10株單克隆抗體的效價(jià)、特異性、穩(wěn)定性、亞型、腹水效價(jià)和中和活性進(jìn)行了鑒定。結(jié)果表明:10株單克隆抗體的細(xì)胞上清效價(jià)高達(dá)1:2048,腹水效價(jià)高達(dá)

4、1:409600；傳代25代和凍存6個(gè)月以后,將雜交瘤細(xì)胞上清進(jìn)行ELISA檢測(cè),發(fā)現(xiàn)細(xì)胞分泌抗體的能力穩(wěn)定性較好；其中有8株雜交瘤細(xì)胞分泌的抗體類(lèi)型為IgG1,2株雜交瘤細(xì)胞分泌的抗體類(lèi)型為IgM,輕鏈類(lèi)型均為κ鏈；利用ELISA方法對(duì)其特異性進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果顯示10株單克隆抗體有6株單克隆抗體與DHV-1C產(chǎn)生交叉反應(yīng),但與SPF雞胚尿囊液、呼腸孤病毒和鵝細(xì)小病毒沒(méi)有交叉反應(yīng),特異性較好。
　　 抗DHV-1單克隆抗體的成功制