豬帶絳蟲組織蛋白酶B基因的克隆、表達(dá)及功能研究.pdf

1、豬囊尾蚴能夠引起豬和人的囊蟲病，影響?zhàn)B豬業(yè)的發(fā)展和人類的健康。組織蛋白酶B是半胱氨酸蛋白酶家族成員，在寄生蟲的營(yíng)養(yǎng)、生長(zhǎng)發(fā)育、組織遷移、蛋白加工和活化以及免疫逃避等方面發(fā)揮重要作用，是預(yù)防及治療多種寄生蟲疾病的潛在的藥物靶標(biāo)和疫苗候選分子。本文對(duì)豬帶絳蟲組織蛋白酶B基因進(jìn)行了克隆、表達(dá)及功能的初步研究。取得了以下結(jié)果:
　　1.以豬帶絳蟲的cDNA為模板，成功地?cái)U(kuò)增了豬帶絳蟲組織蛋白酶B基因(TscpB)。利用生物信息學(xué)工具，對(duì)該

2、序列進(jìn)行分析。結(jié)果表明該基因ORF大小為1074 bp，編碼357個(gè)氨基酸，理論分子質(zhì)量為39.27 ku，具有組織蛋白酶B的特征結(jié)構(gòu)域。Real-time PCR結(jié)果表明，組織蛋白酶B基因在成蟲期表達(dá)量顯著高于囊尾蚴時(shí)期。
　　2.構(gòu)建了原核表達(dá)重組質(zhì)粒pET30a-TscpB，經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)，獲得了以包涵體形式存在的重組蛋白rTscpB，分子大小約為38ku。Western blotting分析表明，rTscpB能被豬囊尾蚴病陽(yáng)性

3、血清特異性識(shí)別。用純化后的rTscpB免疫家兔，4次免疫后產(chǎn)生了特異性的高滴度IgG抗體。免疫組化結(jié)果表明，rTscpB主要表達(dá)于成蟲的體壁及生殖器官，證明豬帶絳蟲組織蛋白酶B可能與蟲體攝取營(yíng)養(yǎng)以及生殖發(fā)育有關(guān)。
　　3.構(gòu)建了畢赤酵母真核表達(dá)重組質(zhì)粒pPIC9K-TscpB。明膠酶譜實(shí)驗(yàn)證明yTscpB具有水解活性，且能夠降解熒光底物Z-Phe-Arg-AMC，最適pH為5.5。yTscpB還能降解豬IgG、BSA、纖連蛋白等大