反義fad2基因與bar基因轉(zhuǎn)化甘藍(lán)型油菜和白菜型油菜的研究.pdf

1、湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文反義fad2基因與bar基因轉(zhuǎn)化甘藍(lán)型油菜和白菜型油菜的研究姓名：肖剛申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：作物遺傳育種指導(dǎo)教師：官春云陳社員20050501摘要高油酸油菜品種選育是目前油菜育種的一個(gè)重要內(nèi)容。而培育抗除草劑作物又是解決目前農(nóng)業(yè)勞動(dòng)力成本增加和環(huán)境污染的有力手段。本研究利用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將bar基因(抗除草劑草丁麟基因)和反義fad2基因?qū)敫仕{(lán)型油菜和白菜型油菜，希望能創(chuàng)建高油酸、抗除草劑的甘藍(lán)型和白菜型油

2、菜育種材料。本研究作了以下工作并取得相關(guān)結(jié)果:1、將bar基因(抗除草劑草丁麟基因)表達(dá)框(barcassettee)整合到能反義表達(dá)油菜fad2基因(油酸脫氫酶)片斷的植物表達(dá)型載體pBI121.NF上，構(gòu)建成另一植物表型載體pBI121.XGe經(jīng)菌落PCR.HindUI酶切檢測(cè)證實(shí)該載體構(gòu)建成功。z、利用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將目的基因?qū)敫仕{(lán)型油菜湘油15和白菜型油菜蒼白谷94。獲得了湘油15號(hào)轉(zhuǎn)化苗5株和蒼白谷94轉(zhuǎn)化苗7株，轉(zhuǎn)化率分

3、別為0.92%和2.52%oPCR檢測(cè)戶d2基因片斷和bar基因確已轉(zhuǎn)入再生苗。3、通過對(duì)油菜子葉柄和子葉節(jié)在離體培養(yǎng)條件下的再生率的比較，建立了油菜子葉節(jié)叢生苗遺傳轉(zhuǎn)化系統(tǒng)。4、以湘油15號(hào)為材料，分別用CTAB法、SDS法和山梨醉法提取油菜基因組DNA，并用紫外光分光光度法、瓊脂糖電泳法對(duì)三種方法對(duì)所提基因組DNA的質(zhì)量和產(chǎn)量做了比較分析，結(jié)果表明以山梨醉法提取油菜基因組DNA的效果為最佳。S、比較了5對(duì)bar墓因的特異引物，和2種