基于DNA拓撲異構(gòu)酶Ⅱ基因?qū)?cè)耳屬（Pleurotus）系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系的研究.pdf

1、側(cè)耳屬種類繁多，分布廣泛，其屬的分類地位和屬內(nèi)種間關(guān)系一直不甚清晰。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展利生物信息學(xué)的進步，分子生物學(xué)技術(shù)和系統(tǒng)學(xué)分析方法廣泛運用到蕈菌系統(tǒng)發(fā)育研究中。 本研究利用嵌套PCR和引物步移法對側(cè)耳屬模式種糙皮側(cè)耳DNA topo Ⅱ序列片段進行擴增、克隆、測序，運用 3’和5’-RACE技術(shù)擴增3’和5’端序列，拼接獲得全基因序列(ORF全長為4713 bp)。運用基因組數(shù)據(jù)庫搜索方法對序列進行分析，表明與真核生

2、物DNA Topo Ⅱ高度同源，與已知Ⅱ型DNA Topo有25％-70％的一致性和44％-83％的相似性，與灰蓋鬼傘的DNA Topo Ⅱ(BAD86854)相似度最高，為70％。 以四種植物為外群，以DNA Topo Ⅱ為分子標(biāo)記，用多種系統(tǒng)分析方法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹不僅反映山現(xiàn)已晉遍接受的真菌各主要類群的系統(tǒng)關(guān)系，還表明了同屬傘菌目的灰蓋鬼傘與糙皮側(cè)耳關(guān)系最為密切，與傳統(tǒng)分類結(jié)果一致。 根據(jù)糙皮側(cè)耳DNA topo Ⅱ

3、全基因，擴增P. lampas DNA topo Ⅱ全序列為4629 bp。Blastp搜索結(jié)果表明推導(dǎo)蛋白序列與已知Ⅱ型DNA Topo有44％-65％的一致性和60％-78％的相似性。所得P.lampas蛋白全序列與糙皮側(cè)耳DNA Topo Ⅱ(ABG73430)相似度最高，為65％，其次是與灰蓋鬼傘DNA Topo Ⅱ(BAD86854)相似度較高，為62％。運川其它蛋白序列搜索程序分析，住P.ostreatur Topo Ⅱ和

4、P.lampas Topo Ⅱ中均具有真核生物DNA Topo Ⅱ的信號序列([LIVMA]-X-E-G-[DN]-S-A-X-[STAG])，也具有'Toprim'區(qū)域和酪氨酸激活位點。 對其余菌株DNAtopo Ⅱ片段進行擴增，得劍各菌株DNAtopo Ⅱ基因約2kb序列，運用多種系統(tǒng)分析軟件構(gòu)建側(cè)耳屬系統(tǒng)發(fā)育樹。側(cè)耳屬16種23個菌株分成兩大支，八大類，即桃紅側(cè)耳、紅側(cè)耳以及兩株扇形側(cè)耳菌株為一大支，為第一類，其余側(cè)耳菌株

5、聚在第二大支，似然樹中兩大支節(jié)點支持率達到了100％，在其它分析方法中此節(jié)點的支持率達劍96％-100％。在第二在支中具核側(cè)耳與其余菌株分開，單獨成一類；鮑魚菇與蓋囊側(cè)耳為一類；兩株肺形和一株未定名的奇異側(cè)耳各自成一類；白靈菇、刺芹側(cè)耳、兩株杏鮑菇菌株和一株佛羅里達側(cè)耳組成一類；金頂側(cè)耳、雞汁菌和秀珍姑為一類；P. hybrid、黃向側(cè)耳、哥倫比亞側(cè)耳和糙皮側(cè)耳組成一類?；贒NA拓撲異構(gòu)酶Ⅱ構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹表明，側(cè)耳屬內(nèi)的種均為多系起