水稻OsGF14-c基因功能的初步分析.pdf

1、GF14是一類在高等植物的基本代謝、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、抗逆以及轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)等多種生理生化途徑中發(fā)揮重要作用的基因。這類基因是14-3-3基因家族的成員，由于啟動(dòng)子結(jié)構(gòu)中具有一個(gè)保守的G-Box元件而得名。我們根據(jù)該類基因的保守序列合成特異性探針，從水稻中花10號(hào)花的cDNA文庫(kù)中篩選到一個(gè)基因，通過(guò)全長(zhǎng)測(cè)序以及同源比較，發(fā)現(xiàn)它的核酸序列與NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中注冊(cè)的水稻GF14-c基因有高達(dá)99％的同源性，并在其上游啟動(dòng)子區(qū)也發(fā)現(xiàn)了一個(gè)保守的G-Box元

2、件，從而確定該基因是水稻的GF14-c基因，我們把它命名為OsGF14-c。OsGF14-c的cDNA全長(zhǎng)1154bp，編碼256個(gè)氨基酸。序列分析表明該基因與酵母同源基因BMH2有71％的同源性，構(gòu)建真核表達(dá)載體pdYES2，借助LiAC轉(zhuǎn)化法將pdYES2導(dǎo)入BMH2缺陷型酵母菌株GG3000，篩選獲得了補(bǔ)償BMH2功能的重組酵母菌株P(guān)YGG。OsGF14-c基因的啟動(dòng)子區(qū)域具有一個(gè)典型的、高等植物特有的順式作用元件G-Box元件，

3、提示該基因可能與轉(zhuǎn)錄因子相互作用，洋蔥表皮瞬時(shí)表達(dá)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了OsGF14-c是核定位的。構(gòu)建原核表達(dá)載體pGF-c2轉(zhuǎn)化大腸桿菌XL1-Blue，篩選獲得了表達(dá)GF14c-MBP融合蛋白的重組菌株，利用直鏈淀粉親和層析純化了OsGF14c-MBP融合蛋白。為了研究該基因在水稻的生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中所起的作用，我們以O(shè)sGF14-c基因的全長(zhǎng)cDNA序列構(gòu)建反義表達(dá)載體載體p35sCAMVF，并分別以O(shè)sGF14-c cDNA序列的特異區(qū)段以及