水稻OsTET3基因功能研究.pdf

1、由革蘭氏陰性菌黃單胞菌水稻變種(Xanthomonas oryzae pv.oryzae，Xoo)引起的水稻白葉枯病(Bacterial Blight，BB)是水稻中最嚴(yán)重的細(xì)菌病害之一，而利用抗白葉枯病基因培育水稻抗病新品種，是防治該病害最為有效的方法。水稻Xa7基因是一個持久的、廣譜的顯性抗白葉枯病基因，在水稻抗白葉枯病研究和應(yīng)用中具有十分積極的作用。水稻Os TET3（GenBank accession: Os03g0853200

2、）是Xa7抗病應(yīng)答中受白葉枯病誘導(dǎo)表達(dá)的基因，編碼含有四次跨膜結(jié)構(gòu)域的Tetraspanins超家族蛋白成員，目前功能未知。
　　為了探究水稻OsTET3基因的功能及其抗病機(jī)理，本文利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的水稻轉(zhuǎn)基因法，將OsTET3基因過表達(dá)載體轉(zhuǎn)化到感病水稻品種中花11的愈傷組織中，成功獲得16個轉(zhuǎn)基因株系，其中7個T1代株系經(jīng)篩選、鑒定后，在白天30℃、12h光照/晚上28℃、12h黑暗的培養(yǎng)箱中，對五葉期的植株進(jìn)行了白葉枯病菌抗性

3、鑒定。與野生型水稻中花11相比，個別OsTET3過表達(dá)轉(zhuǎn)基因株系對白葉枯病菌的抗性有所提高，但還需要后期移栽大田，進(jìn)行自然環(huán)境下的抗病性鑒定。同時，利用CRISPR/Cas9技術(shù)敲除水稻中花11的OsTET3基因，獲得2株成功地敲除的純合轉(zhuǎn)基因突變體。構(gòu)建了Os TET3 promoter∷GUS表達(dá)載體，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將其轉(zhuǎn)入水稻中花11的愈傷組織中，并對獲得的6株陽性轉(zhuǎn)基因苗進(jìn)行GUS活性鑒定，發(fā)現(xiàn)OsTET3基因主要在根部表達(dá)，