水稻白葉枯病菌PXO99A中PhaR基因功能的初步研究.pdf

1、水稻白葉枯病菌Xanthomonasoryzaepv.oryzae（Xoo）引起水稻上重要的細菌病害。在對水稻白葉枯病菌PXO99A的研究中發(fā)現(xiàn)存在有PhaR基因，該基因可以編碼一種PHAs（聚羥基脂肪酸酯）顆粒相關(guān)的蛋白。PHAs（聚羥基脂肪酸酯）是一種細胞內(nèi)碳和能量的儲藏物質(zhì)，多種微生物在一定條件下能在胞內(nèi)積累PHAs作為碳源和能源的貯存物，PHAs比糖原、多聚磷酸或脂肪更加普遍地存在于微生物中。
　　 本研究采用基因敲除的

2、方法構(gòu)建PhaR基因的缺失突變體，通過缺失突變體和野生型菌的性狀對比，來進一步研究該基因的功能。
　　 首先通過重疊延伸PCR的方法來構(gòu)建用于PhaR缺失突變的重組體pMDPhaRF1F2，將其導(dǎo)入PXO99A后，篩選抗卡那霉素的PXO99轉(zhuǎn)化子。利用PCR驗證法篩選發(fā)生雙交換的缺失突變體PXO△PhaR。經(jīng)缺失突變體與野生型菌株性狀比較發(fā)現(xiàn)，缺失突變體PXO△PhaR的菌落形態(tài)與野生型菌有著較明顯的差異、游動性減弱，菌體生長緩

3、慢，并且產(chǎn)生EPS的能力減弱;而在產(chǎn)淀粉酶和耐H2O2脅迫方面，則與野生型菌株無差異。
　　 煙草過敏反應(yīng)和水稻致病性測定發(fā)現(xiàn)，缺失突變體PXO△PhaR在煙草上激發(fā)HR反應(yīng)，但對水稻的致病性減弱。
　　 由此可見，PhaR基因影響著黃單胞菌菌落形態(tài)等一系列性狀，并且影響黃單胞菌的致病性。從表型上可以發(fā)現(xiàn)，缺失突變體在產(chǎn)生胞外多糖方面與野生型菌有著十分明顯的差異，而胞外多糖也是很重要的一個致病因子。對于PhaR基因在黃單