16250.核糖核酸酶onconase制備過(guò)程優(yōu)化研究

1、華東理工大學(xué)碩士學(xué)位論文第1頁(yè)核糖核酸酶onconase制備過(guò)程優(yōu)化研究摘要豹蛙酶(0nconase，簡(jiǎn)稱(chēng)0NC)是一種從北極豹蛙卵母細(xì)胞和早期胚胎中提取的核糖核酸酶，屬于RNaSeA超家族，研究證實(shí)其對(duì)許多腫瘤細(xì)胞和實(shí)體腫瘤都具有殺傷作用。以一株表達(dá)豹蛙酶的基因工程菌為研究對(duì)象，分別在搖瓶和37L小型發(fā)酵罐中對(duì)工程菌發(fā)酵工藝進(jìn)行了優(yōu)化，確定了接種量2％、IPTG濃度05mM、誘導(dǎo)時(shí)間35小時(shí)，菌體內(nèi)豹蛙酶表達(dá)量占胞內(nèi)蛋白總量的30％以

2、上。進(jìn)一步對(duì)豹蛙酶的純化工藝進(jìn)行探索，建立了菌體破碎、包涵體洗滌、蛋白復(fù)性、蛋白純化工藝。文章中采用的復(fù)性方法主要是稀釋復(fù)性。為得到最優(yōu)的復(fù)性條件，本實(shí)驗(yàn)對(duì)不同復(fù)性溫度研究，結(jié)果表明當(dāng)復(fù)性溫度在4℃時(shí)，復(fù)性效果最優(yōu)；對(duì)復(fù)性緩沖液中鹽類(lèi)(主要是精氨酸和尿素的選擇)研究，結(jié)果表明當(dāng)復(fù)性緩沖液中加入05M的精氨酸時(shí)，復(fù)性效果最優(yōu)；對(duì)復(fù)性緩沖液中尿素濃度研究，結(jié)果表明當(dāng)復(fù)性緩沖液中加入尿素濃度為2M時(shí)，復(fù)性效果最優(yōu)：對(duì)GsSG加入復(fù)性緩沖液的時(shí)