16250.核糖核酸酶onconase制備過程優(yōu)化研究

1、華東理工大學碩士學位論文第1頁核糖核酸酶onconase制備過程優(yōu)化研究摘要豹蛙酶(0nconase，簡稱0NC)是一種從北極豹蛙卵母細胞和早期胚胎中提取的核糖核酸酶，屬于RNaSeA超家族，研究證實其對許多腫瘤細胞和實體腫瘤都具有殺傷作用。以一株表達豹蛙酶的基因工程菌為研究對象，分別在搖瓶和37L小型發(fā)酵罐中對工程菌發(fā)酵工藝進行了優(yōu)化，確定了接種量2％、IPTG濃度05mM、誘導時間35小時，菌體內豹蛙酶表達量占胞內蛋白總量的30％以

2、上。進一步對豹蛙酶的純化工藝進行探索，建立了菌體破碎、包涵體洗滌、蛋白復性、蛋白純化工藝。文章中采用的復性方法主要是稀釋復性。為得到最優(yōu)的復性條件，本實驗對不同復性溫度研究，結果表明當復性溫度在4℃時，復性效果最優(yōu)；對復性緩沖液中鹽類(主要是精氨酸和尿素的選擇)研究，結果表明當復性緩沖液中加入05M的精氨酸時，復性效果最優(yōu)；對復性緩沖液中尿素濃度研究，結果表明當復性緩沖液中加入尿素濃度為2M時，復性效果最優(yōu)：對GsSG加入復性緩沖液的時