梧桐子中止血活性部位的篩選及分析.pdf

1、　　本研究主要以梧桐子止血藥理實(shí)驗(yàn)研究為基礎(chǔ)，以CMC篩選為輔助手段，從梧桐子中篩選出有止血作用的活性部位，進(jìn)一步分離出有藥用活性的有效單體，并建立起含量測(cè)定方法及質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，力圖闡明梧桐子中止血藥用部分的活性成分，為進(jìn)一步研究梧桐子止血作用機(jī)制，了解梧桐子中止血成分的性質(zhì)提供科學(xué)資料。本論文研究實(shí)驗(yàn)方法如下：　　1.采用CMC法篩選活性部位：制備活性細(xì)胞膜固定相，用HPLC法來研究各樣品在血管細(xì)胞膜、紅細(xì)胞膜、白細(xì)胞膜、血小板上的

2、保留特性，判斷被篩樣品與活性細(xì)胞膜的親和力大小，從而獲得各樣品對(duì)細(xì)胞膜的活性作用信息?！　?.采用SFE法提取梧桐子脂溶性部分，用GC-MS法進(jìn)行分離、分析，并鑒定梧桐子脂溶性部分的化學(xué)成分，為研究梧桐脂溶性部位提供參考。　　3.采用整體藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)、定性反應(yīng)、結(jié)合UV、HPLC及TLC分析，篩選出梧桐子中有止血作用的活性部位，確定分離提取工藝?！　?.采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，以總黃酮含量(﹪)為考察指標(biāo)，選擇最佳提取梧桐子總黃酮工藝，并

3、采用紫外分光光度法檢測(cè)梧桐子中總黃酮的含量?！　MC篩選結(jié)果表明，梧桐子中有效活性部位在血管、血小板、白細(xì)胞、紅細(xì)胞膜上均無保留，提示梧桐子中各成分與血管、血小板、紅細(xì)胞、白細(xì)胞膜受體無親和作用；SFE法提取結(jié)果表明，梧桐子脂溶性提取物呈黃色油膏狀，重為330.0g，提取率為1.67﹪；用GC-MS法共分離出20個(gè)色譜峰，鑒定了11個(gè)組分，占色譜總流出峰面積的83.37﹪；GC/MSSolution色譜工作站和NIST質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫系統(tǒng)

4、檢索分析結(jié)果表明，梧桐子脂溶性部分多為不飽和脂肪酸和酯類化合物；藥理實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，從梧桐子中篩選的活性部位有明顯的促凝血作用，與陽性藥比較平均凝血時(shí)間明顯縮短(為61.4s，陽性藥平均凝血時(shí)間為71.3s)，與空白比較有顯著性差異(P＜0.05)；定性反應(yīng)、UV、HPLC及TLC分析結(jié)果表明，所篩選的梧桐子止血活性部位屬于黃酮類；正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明有效部位各因素作用主次為A＞B＞C，即提取溶劑的量＞回流次數(shù)＞回流時(shí)間；SAS軟件方差分析結(jié)