載銅硅酸鹽納米微粒對腸上皮細(xì)胞增殖、分化和遷移的影響.pdf

1、本文通過對雞腸上皮細(xì)胞(IEC)的分離和原代培養(yǎng)建立IEC細(xì)胞系，比較酶對細(xì)胞的消化和增殖影響，促進(jìn)細(xì)胞增殖的最適血清濃度，CO2濃度和溫度。然后以IEC細(xì)胞系為實驗?zāi)Ｐ停芯枯d銅硅酸鹽納米微粒(CSN)對雞IEC形態(tài)、增殖、分化及損傷后細(xì)胞遷移的影響。 研究方法：1.采用不同的消化酶體外分離雞IEC，并培養(yǎng)。2.IEC生長、增殖檢測采用MTT法和細(xì)胞計數(shù)法。3.用倒置顯微鏡、透射電鏡觀察IEC生長狀態(tài)、形態(tài)。4.IEC鑒定用堿

2、性磷酸酶和H-E染色法。 研究結(jié)果：1.用300U/mLⅪ型膠原酶和0.1mg/mLⅠ型中性蛋白酶在37℃下聯(lián)合消化40min，經(jīng)離心可收集到大量的細(xì)胞。在倒置顯微鏡下觀察，其粘膜懸液主要由隱窩樣上皮細(xì)胞團(tuán)組成，細(xì)胞呈球性或卵石狀，邊界清楚，胞漿豐富，核為圓形或卵石狀，核內(nèi)染色質(zhì)稀疏空亮，核仁1～2個。2.在含2.5～5.0％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中，39℃，5～7.5％CO2下培養(yǎng)，一定時間后，在透射電鏡下，可觀察到細(xì)胞具有

3、典型的腸上皮隱窩細(xì)胞特征，IEC表面有大量的微絨毛，細(xì)胞貼壁短期內(nèi)細(xì)胞間的緊密連接，橋粒等，細(xì)胞內(nèi)含有豐富的線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等。IEC在1～2d貼壁，6～7d明顯增殖，10～12d匯合成片，細(xì)胞呈多角形單層生長。3.本試驗用堿性磷酸酶作標(biāo)記物進(jìn)行免疫酶染色，結(jié)果顯示，分離的細(xì)胞培養(yǎng)至第7天時，(91.16±6.97)％細(xì)胞呈藍(lán)黑色反應(yīng)。4.與對照組相比，添加30μg/mL或50μg/mLCSN后細(xì)胞形態(tài)未發(fā)生變化，在第10天時，細(xì)胞表面的

4、微絨毛比未加CSN的更加明顯；添加CSN培養(yǎng)孔中細(xì)胞的增殖更加明顯，該孔細(xì)胞在第10天時已完全匯合成片，而未添加孔細(xì)胞在第10天時還有未完全匯合區(qū)域；CSN可使單位面積里遷移細(xì)胞的數(shù)量顯著增多(P＜0.05)，能促進(jìn)損傷后細(xì)胞的快速修復(fù)。 研究結(jié)論：1.確定了用300U/mL膠原酶Ⅺ和0.1mg/mLⅠ型中性蛋白酶聯(lián)合消化法為較好的細(xì)胞分離方法，含2.5％～5％FCS為較適宜的血清濃度，39℃和5％～7.5％CO2為較好的培養(yǎng)條