胸腺素β4對體外培養(yǎng)的人晶狀體上皮細(xì)胞增殖、遷移及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)分化的影響.pdf

1、目的：后囊混濁(Posterior capsule opaciftcation,PCO)主要由術(shù)后殘留的晶狀體上皮細(xì)胞(lens epithelial cells,LECs)的增殖、遷移及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)分化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)引起。胸腺素β4(thymosinβ4,Tβ4)是一種重要的肌動蛋白耦聯(lián)蛋白,參與介導(dǎo)多種生物學(xué)反應(yīng)。本實驗通過研究Tβ4對體外培養(yǎng)的人晶體上皮細(xì)胞增殖、遷移及

2、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)分化的影響,探討Tβ4在PCO防治中的可能作用。
　　方法
　　1.用MTT法檢測Tβ4對LECs增殖的影響。用含不同濃度Tβ4(0ng/ml、1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml、1000ng/ml)無血清培養(yǎng)基處理LECs,分別于24h、48h、72h行MTT檢測,測量OD值。
　　2.細(xì)胞劃痕實驗及Transwell小室遷移模型觀察Tβ4對LECs遷移的影響。
　　(1)劃痕后細(xì)胞培養(yǎng)基

3、中加入不同濃度Tβ4(0ng/ml、1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml、1000ng/ml)的0.1％牛血清白蛋白DMEM培養(yǎng)基,分別于劃痕后0h、24h、48h選取10個隨機視野拍照記錄劃痕間距(前后拍照位置須一致),比較不同時間點不同濃度的平均遷移距離。
　　(2)種細(xì)胞于上室,下室為不同濃度Tβ4(0ng/ml、1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml、1000ng/ml)的20%胎牛血清DMEM培養(yǎng)基,作

4、用24h后比較不同濃度穿過小室的平均細(xì)胞數(shù)目。
　　3.實時定量PCR技術(shù)比較處理72h后Tβ4處理組和正常對照組中E-鈣粘蛋白及α-SMAmRNA表達水平的變化以檢測Tβ4對LECs的轉(zhuǎn)分化作用的影響。
　　結(jié)果
　　1.與對照組相比,當(dāng)濃度為100ng/ml、1000ng/ml時Tβ4能夠明顯促進LECs的增殖,差異有顯著性(P<0.05)。相同藥物濃度組隨著作用時間的延長促進作用加強,各時間點相互比較差異亦有顯著

5、性(P<0.05)。
　　2.24h各濃度組(0~1000ng/ml)平均遷移距離分別為:329.6621±47.43715μm,354.2761±52.5730μm,453.5897±46.3792μm,499.6127±46.0270μm,555.4763±71.6129μm;48h各濃度組(0~1000ng/ml)平均遷移距離為:614.6647±97.2274μm,636.1453±649.7268μm,720.5249±

6、41.9510μm,739.9166±85.3627μm,770.9152±62.3144μm。10ng/ml、100ng/ml、1000ng/ml處理組相對于對照組而言,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),且細(xì)胞遷移距離隨時間和濃度遞增。
　　Tβ4處理24h后,穿過小室的細(xì)胞數(shù)各組(0~1000ng/ml)分別為82±3個,109±6個,128±10個,163±5個,204±11個。10ng/ml、100ng/ml、1000ng

7、/ml處理組相對于對照組而言,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),且細(xì)胞遷移能力隨濃度遞增。
　　3.Tβ4加藥處理72h后LECs表達α-SMA、E-鈣粘蛋白mRNA水平的變化:加藥處理后,α-SMA表達量升高(151.7±5.0)%,E-鈣粘蛋白表達量下降(68.0±8.1)%,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論：胸腺素β4可促進人晶狀體上皮細(xì)胞增殖、遷移及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)分化,其在PCO防治中的可能作用值得作進一步研