13399.兩種海洋雙殼貝類凝集素及其抑菌機(jī)制的研究

1、學(xué)校代碼：10225學(xué)號(hào)：B13161學(xué)位論文兩種海洋雙殼貝類凝集素及其抑菌機(jī)制的研究指導(dǎo)教師姓名：申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：論文提交日期：授予學(xué)位單位：繕孝旁李偉教授博士東北林業(yè)大學(xué)2013年10月東北林業(yè)大學(xué)學(xué)科專業(yè)：論文答辯日期：授予學(xué)位日期：答辯委員會(huì)主席：張彥龍教授春必櫛素犬學(xué)細(xì)胞生物學(xué)2013年12月2013年12月摘要摘要海洋雙殼貝類屬于無脊椎動(dòng)物，因其不具有脊椎動(dòng)物的免疫系統(tǒng)，所以自身形成了獨(dú)特的天然免疫系統(tǒng)，而凝集素是它重要的天然

2、免疫分子之一。在復(fù)雜的海洋環(huán)境中，雙殼貝類產(chǎn)生了多種糖特異性各異的具有特定生理活性的凝集素。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)雙殼貝類凝集素具有的抑菌作用，表明其可以成為潛在的抗菌物質(zhì)來源。本文采用了CelluloseDE52、SephadexG100以及HPLC等分離手段，從青蛤血淋巴中分離鑒定出一種新的能結(jié)合酵母的Ca依賴型凝集素(CSL)，其分子量為72kDa，含有18及40kDa亞基。在自然狀態(tài)下，為非聚集狀態(tài)的單一分子。它的18kDa亞基的N末端序列為

3、AKPYDDAKYD。該凝集素經(jīng)過胰蛋白酶消化并通過nanoESIMS／MS分析，得到Y(jié)VAEEADR、LMTEVDLER、ENALDKAEQLEQK、SIADDDRIDQLEK和EVDRLEDELLAEK等5個(gè)短肽序列。N一末端序列及5個(gè)短肽序列與其它海洋雙殼貝類凝集素彳i具有同源性。CSL富含酸性氨基酸Asx和Glx，而Met、Phe和Xyr含量較少，總糖含量為162％。CSL的寡糖鏈與肽鏈之間的連接方式為O糖苷鍵。該凝集素在040

4、。C具有較高的血凝活性。在pH67時(shí)血凝活性穩(wěn)定。D甘露糖(D—Man)和N乙酰一D半乳糖胺(GalNAc)對(duì)其血凝活性具有抑制作用。CSL具有凝集大腸桿菌(Escherichiacoli)和釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)的作用，對(duì)酵母細(xì)胞的凝集作用可被DMan抑制。通過CelluloseDE52、SephadexG100及HPLC等分離手段從菲律賓蛤仔中分離出一種菲律賓蛤仔凝集素(MCLT)，其分子量為14

5、8kDa，含有62和36kDa亞基。GalNAc和豬胃黏蛋白(Mucinfromporcinestomach，PSM)對(duì)其血凝活性具有抑制作用。MCLT經(jīng)過胰蛋白酶消化并通過nanoESI—MS／MS分析，得到的6個(gè)短肽序列，分別為VQRVTMD、MAPGFVNNK、NAIFYVDVDK、ERVHPPRPGLQR、AⅪDMASPFIVMR和IDMASPFIVMRDPVnrR。它的分子量及6個(gè)短肽序列與已經(jīng)報(bào)道的菲律賓蛤仔凝集素不同，因此

6、它是一種新的菲律賓蛤仔凝集素。MCLT在040。C具有較高的血凝活性。在pH58時(shí)其血凝活性穩(wěn)定。MCLT具有凝集HCl處理的Ecoli、金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、產(chǎn)氣莢膜梭茵(Clostridiumperfringens)及希瓦氏菌(Shewanellasp)的作用，不凝集天然狀態(tài)的Ecoli、Saureus、Cperfringens、枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)及Shewanel

7、lasp。研究了CSL、MCLT以及貽貝凝集素(Crenomytilusgrayanuslectin，CGL)等三種貝類凝集素的抑菌活性。CSL對(duì)Ecoli、Cperfringens和Bsubtilis具有抑菌活性。呼吸抑制測(cè)試表明，CSL抑制Ecoli和Cperfringens的EMP以及矗subtilis的HMP。CSL與Ecoli、Cperfringens、Bsubtilis共培養(yǎng)時(shí)，隨著CSL濃度的增加，這三種細(xì)菌的DNA、RN