2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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1、專業(yè)學(xué)位碩士學(xué)位論文抗體分離純化用層析介質(zhì)的研究Developmentofchromatographymatricesforantibodypurification作者姓名:萱建邊專業(yè)(工程領(lǐng)域):生物工程學(xué)號:31218027指導(dǎo)教師:矍逮亟塾援一完成日期:大連理工大學(xué)DalianUniversityofTechnology大連理工大學(xué)專業(yè)學(xué)位碩士學(xué)位論文摘要色譜技術(shù)是目前抗體工業(yè)化生產(chǎn)過程中的核心環(huán)節(jié),而質(zhì)優(yōu)、價廉的層析介質(zhì)是保障抗

2、體生產(chǎn)效率和過程經(jīng)濟性的基礎(chǔ)。目前,抗體大規(guī)模生產(chǎn)過程中主要存在兩個突出問題顯著影響產(chǎn)品回收率和生產(chǎn)成本:(1)單鏈抗體在原核表達(dá)過程中存在核酸去除困難的問題,嚴(yán)重影響產(chǎn)品收率。由于單鏈抗體是典型的堿性蛋白質(zhì)(等電點為90),與核酸分子間存在較強的靜電吸附,利用傳統(tǒng)的聚乙烯亞胺(PEI)沉淀核酸時,單鏈抗體易出現(xiàn)共沉淀析出,造成蛋白損失。(2)傳統(tǒng)抗體的精分離過程依賴于蛋白A親和純化過程,其高昂的成本是目前抗體類產(chǎn)品價格居高不下的主要原

3、因,而基因重組蛋白A和進口瓊脂糖凝膠是造成這類層析介質(zhì)高成本的主要因素。本論文圍繞以上兩個問題展開工作,具體研究內(nèi)容包括:瓊脂糖凝膠的制備和粒徑控制;強陰離子交換介質(zhì)的制備及其在去除核酸,純化單鏈抗體中的應(yīng)用:基于4一巰基乙基吡啶(MEP)的疏水電荷誘導(dǎo)層析介質(zhì)作為“仿生蛋白A”的基質(zhì)材料優(yōu)化及其在抗體純化中的效果比較。主要內(nèi)容和結(jié)果如下:采用反相懸浮攪拌的方法制備了瓊脂糖凝膠,通過研究交聯(lián)及篩分的方法,獲得了具有較好物化穩(wěn)定性的瓊脂糖

4、微球。研究發(fā)現(xiàn),采用加水靜置可有效破壞乳化平衡,獲得較好的破乳效果,有效縮短后處理時間,降低有機溶劑用量;采用200目篩網(wǎng),經(jīng)過4輪篩分,所獲得的交聯(lián)瓊脂糖凝膠具有合適的粒徑分布。以瓊脂糖凝膠為基質(zhì)合成強陰離子核酸吸附劑。實驗對比了不同活化劑對基質(zhì)活化密度的影響,之后以乙二胺為連接臂,采用縮合反應(yīng)偶聯(lián)甜菜堿,獲得了不同配基密度的強陰離子吸附劑。較優(yōu)的處理條件為pH為85,NaCl濃度為10mol/L,吸附劑用量為034g/ml發(fā)酵細(xì)胞破

5、碎上清時,可以獲得較好的核酸去除效果,此時,核酸去除率大于98%,目的蛋白損失少于10%。實驗分別以瓊脂糖、纖維素和聚乙烯醇三種微球介質(zhì)為基質(zhì)合成了MEP疏水電荷誘導(dǎo)層析介質(zhì),比較了它們的結(jié)構(gòu)性能和抗體分離效果。研究發(fā)現(xiàn),瓊脂糖凝膠和纖維素球基質(zhì)具有類似的化學(xué)性質(zhì),其較優(yōu)的合成方法為:活化時間為8h,NaOH濃度為10mol/L,活化劑用量為o08mL/g,N一溴代琥珀酰亞胺用量為008g/mL,溴化反應(yīng)時間為lh,MEP用量達(dá)到O06

6、g/ggel,偶聯(lián)時間為20h,偶聯(lián)pH為10;聚乙烯醇基質(zhì)較優(yōu)的合成方法為:活化時間為20h,NaOH濃度為12mol/L,活化劑用量為010mL/ggel,溴化反應(yīng)時間為1h,MEP用量達(dá)到O04edggel,偶聯(lián)時間為20h,偶聯(lián)pH為lO。三種基質(zhì)的吸附劑對人IgG的吸附容量分別為326mg/mL、294mg/mL和190mg/mL,對人血清中抗體組分的一步純度均可達(dá)到70%以上。關(guān)鍵詞:抗體分離;色譜基質(zhì);甜菜堿;4一巰基乙基

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