肝癌血清標(biāo)志蛋白的分離、純化、鑒定及抗體制備的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本文對(duì)肝癌血清標(biāo)志蛋白的分離、純化、鑒定及抗體制備進(jìn)行了研究。結(jié)果表明： 1.PH5.6的等電點(diǎn)沉淀法能在盡量保留血清中目標(biāo)蛋白的同時(shí)，最高效地去除高豐度雜蛋白，可作為初步分離純化肝癌血清標(biāo)志蛋白的第一步。 2.Tricine-SDS-PAGE電泳是一種有效分離小分子蛋白的簡(jiǎn)便有效的方法，可作為進(jìn)一步分離純化肝癌血清標(biāo)志蛋白的第二步。 3.第三步電泳得到的目標(biāo)蛋白，可通過兩種方法進(jìn)一步分離和鑒定。第一種是應(yīng)用HP

2、LG-MS/MS技術(shù)，通過對(duì)標(biāo)志蛋白8710Da、8596 Da成功鑒定證實(shí)，HPLC-MS-MS技術(shù)可以達(dá)到分離鑒定部分目標(biāo)蛋白的目的。第二種是利用CE-MS/MS技術(shù)分離鑒定，雖然本研究中CE-MS/MS對(duì)目標(biāo)蛋白分離鑒定沒有得到理想結(jié)果，但該技術(shù)對(duì)酶解標(biāo)樣BSA的成功鑒定，提示CE-MS/MS技術(shù)仍是具有價(jià)值的分離鑒定目標(biāo)蛋白的方法。 4.第四步利用分離純化鑒定的肝癌血清標(biāo)志蛋白制備克隆抗體。肝癌血清標(biāo)志蛋白7984M/Z