24924.甲狀腺激素結(jié)合蛋白中激素結(jié)合釋放的結(jié)構(gòu)機(jī)制

1、目錄摘要一1Abstract一一一41前言一一一711甲狀腺激素結(jié)合蛋白的生化特性和生理功能一712絲氨酸蛋白酶抑制劑家族的結(jié)構(gòu)和功能一7121絲氨酸蛋白酶抑制劑家族共同的核心結(jié)構(gòu)8121原始狀態(tài)下絲氨酸蛋白酶抑制劑家族的構(gòu)象變化9123絲氨酸蛋白酶抑制劑家族從S狀態(tài)到R狀態(tài)的轉(zhuǎn)變一一一一10124絲氨酸蛋白酶抑制劑家族的抑制機(jī)制一11125絲氨酸蛋白酶抑制劑家族的活性調(diào)控一一1313甲狀腺激素結(jié)合蛋白的研究進(jìn)展和尚未解決的問題142材

2、料和方法一一一一一一1721重組蛋白的載體一一一一一一一一17211重組甲狀腺激素結(jié)合蛋白的載體結(jié)構(gòu)一17212重組皮質(zhì)類激素結(jié)合蛋白的載體結(jié)構(gòu)19213重組0【antitrypsin的載體結(jié)構(gòu)一一19214重組SENP2(sentrin／sumospecificprotease2)的載體結(jié)構(gòu)一一一一一一1922位點(diǎn)特異性突變一一1923蛋白質(zhì)的表達(dá)和純化一一一21231甲狀腺激素結(jié)合蛋白和皮質(zhì)類激素結(jié)合蛋白的表達(dá)純化都遵循相同的步驟2

3、1232Gtantitrypsin被根據(jù)如下的步驟表達(dá)和純化24233SENP2被按照下面的步驟表達(dá)和純化一一一一2424蛋白質(zhì)的酶切一一一一一一一一一24241TBGatl的酶切一一一一24242TBG和CBG的酶切一一一一2425蛋白質(zhì)結(jié)晶和蛋白質(zhì)晶體浸泡一一2526蛋白質(zhì)晶體結(jié)構(gòu)分析的軟件和方法一一一2627蛋白質(zhì)的動力學(xué)仿真一一2828配體和蛋白質(zhì)接觸分析一一2829甲狀腺激素結(jié)合蛋白的結(jié)合能力分析一29291制備Lthyrox

4、ine5和6carboxyfluorescein熒光探針一一29292特異性的飽和結(jié)合一一30293競爭性結(jié)合一一一一33210數(shù)值的統(tǒng)計分析363T4熒光探針的結(jié)合特性一一一一3731介紹一一一3732實驗結(jié)果一一38321活性環(huán)被切斷的TBG的結(jié)構(gòu)一38322晶體結(jié)構(gòu)表明T4和T4熒光探針在cTBGatl的結(jié)合位點(diǎn)擁有相同的方向定位和接觸位點(diǎn)3971T46CF作為一種有效的工具可以用來評估TBG結(jié)構(gòu)變化對T4結(jié)合釋放的影響一72從R