25124.surfactin體外抗腫瘤機理研究

1、分類號：Q279密級：(秘密、機密、絕密)學校代碼：10057研究生學號：08813016Surfactin體外抗腫瘤機理研究ResearchontheAntitumorMechanismofSurfactininVitro專業(yè)名稱：營養(yǎng)與食品衛(wèi)生學(醫(yī))指導教師姓名：曹小紅教授(副教授)研究生姓名：趙思思申請學位級別：醫(yī)學碩士論文提交同期：2010年12月論文課題來源：國家項目學位授予單位：天津科技大學摘要實驗采用的枯草芽孢桿菌Bac

2、illusnattoTK1發(fā)酵產(chǎn)生的脂肽——su渤ctin，被廣泛認為是一種安全高效的生物表面活性劑。它具有顯著的抗菌，抗腫瘤，抗病毒及溶解血栓等功能，其中關于抗腫瘤和抗病毒功能的研究較少。課題組經(jīng)過前期實驗發(fā)現(xiàn)，surfactin能夠通過線粒體途徑誘導MCF一7乳腺癌細胞發(fā)生凋亡。線粒體通透性轉換孔(MPTP，簡稱PT孔)作為細胞的“生命閘門”，在細胞凋亡過程中發(fā)揮著至關重要的作用。本文主要探討PT孔在surfactin誘導的MCF7

3、乳腺癌細胞凋亡過程中的作用機理，以及ERK／MAPK通路與細胞增殖和凋亡的關系。surfactin誘導MCF一7乳腺癌細胞的PT孔開放與細胞凋亡的關系及作用機理，以及，ERK／MAPK通路對于腫瘤細胞生長增殖的影響。本論文以體外培養(yǎng)的人乳腺癌MCF7細胞株為研究對象，探討surfactin對腫瘤細胞增殖和凋亡的作用，并深入探討相關的作用機理。體外增長抑制實驗表明，surfactin能顯著抑制MCF7乳腺癌細胞的增殖，這種抑制作用呈現(xiàn)出濃

4、度和時問依賴關系，作用24h的IC50是402pg／mL，作用48h的IC50是323“∥mL。HE染色法和AO／EB、Hoechst33342／PI熒光雙染發(fā)現(xiàn)，surfactin誘導MCF7細胞發(fā)生典型的凋亡形態(tài)學改變。實驗采用激光共聚焦顯微鏡(LSCM)觀察發(fā)現(xiàn)，經(jīng)surfactin作用后，MCF一7細胞內的活性氧(ROS)水平和胞內游離鈣離子(Ca2)水平顯著升高，這一趨勢分別可被ROS抑$O齊IJNAC和胞內Ca2螯合劑BAP

5、7rA—AM所抑制，且Ca2水平的升高是lhROS的大量生成所致。同時發(fā)現(xiàn)，ROS的升高將會導致PT孔的開放，PT孔專一性抑制劑CsA可以抑制其開放，PT孔的丌放直接引起線粒體跨膜電位(△甲m)的顯著降低，這一趨勢可被NAC、BAPTA—AM矛F(xiàn)ICsA所抑制。通過免疫印跡(Westernblotting)實驗發(fā)現(xiàn)，PT孔開放后，線粒體內細胞色素C(CytC)減少，而胞漿內的CytC則逐漸增多，胞caspase一9蛋白的表達量也隨之增加