新型卟啉化合物體外抗腫瘤作用篩選及機理研究.pdf

1、目的:觀察新合成的金屬卟啉化合物對肝癌細胞(HepG2)、胃癌細胞(SGC-7901)、結(jié)腸癌細胞(sw480)、高分化鼻咽癌細胞(CNE-1)、低分化鼻咽癌細胞(CNE-2)、小鼠單核巨噬細胞(RAW264.7)、肺癌細胞(A549)以及乳腺癌細胞(MCF-7)的抗腫瘤作用,并篩選療效較好的藥物進一步研究卟啉化合物抗腫瘤作用機理。
　　方法:1.藥物抗腫瘤活性篩選:SRB法和MTT法測定藥物對腫瘤細胞增殖的影響;鄰二氮菲-Fe2

2、+氧化法和鄰苯三酚自氧化法測定藥物對腫瘤細胞清除羥自由基和超氧陰離子自由基能力的影響;Griess法測定腫瘤細胞中NO自由基含量的變化;Giemsa染色法觀察腫瘤細胞形態(tài)學(xué)的變化。2.藥物抗腫瘤機理研究:羅丹明123測定線粒體膜電位變化;流式細胞儀檢測細胞凋亡;DNA完整性檢測;實時熒光定量PCR法檢測腫瘤細胞C-myc基因的mRNA表達量的變化;ELISA法測定腫瘤細胞端粒酶活性的變化。
　　結(jié)果:八種金屬卟啉化合物對腫瘤細胞的

3、生長均具有一定的抑制作用,且隨著藥物濃度的升高,細胞的生長抑制率基本呈上升的趨勢;細胞對羥自由基和超氧陰離子自由基的清除能力下降;細胞上清液中 NO自由基的含量升高;Giemsa染色后觀察到凋亡細胞數(shù)目明顯增加且藥物對 HepG2細胞作用最顯著。上述效果最好的兩種藥物是Rup-03和Rup-04,Rup-03對五種腫瘤細胞(HepG2、CNE-1、CNE-2、sw480以及RAW264.7細胞)的殺傷作用較好,Rup-04對 SGC-7

4、901細胞的殺傷作用較好。隨著Rup-03濃度的增加(10-9~10-6 mol/L),線粒體膜電位熒光強度減弱;流式細胞儀顯示HepG2細胞凋亡率逐漸增加;瓊脂糖凝膠電泳圖顯示DNA發(fā)生了降解;C-myc基因的 mRNA相對表達量減少且端粒酶活性降低。這些結(jié)果均表明,細胞凋亡程度隨著藥物濃度的增加而加重。
　　結(jié)論:八種新型金屬卟啉化合物對腫瘤細胞均具有一定的殺傷作用,且殺傷作用與濃度具有一定相關(guān)性,總體效果最好的藥物為Rup-