45342.生物堿對胰蛋白酶作用的光譜變化

1、四川大學(xué)碩士學(xué)位論文生物堿對胰蛋白酶作用的光譜變化姓名：姜驊申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：劉克武20050501四川大學(xué)碩士學(xué)位論文有強抗腫瘤活性的細胞毒生物堿，可用于治療白血病。對上述三種生物堿與胰蛋白酶的相互作用進行探討，一方面可以提供一些有意義的基礎(chǔ)理論數(shù)據(jù)，另一方面可以進一步闡明胰蛋白酶與小分子作用時的構(gòu)象變化。光譜法是近年來發(fā)展起來的一種方法，適于研究溶液中蛋白質(zhì)分子的構(gòu)象變化。用紫外光譜法可以得到芳香

2、族氨基酸殘基在蛋白質(zhì)分子中的位置(即表面或內(nèi)部)、環(huán)境及數(shù)量：在物理和化學(xué)因素的影響下，蛋白質(zhì)二、三級結(jié)構(gòu)的變化。熒光光譜法可用作研究蛋白質(zhì)分子的構(gòu)象變化，色氨酸(TrY)殘基和酪氨酸(Tyr)殘基的微環(huán)境等。本文得到了三種生物堿與胰蛋白酶相互作用后的(200400nm)紫外差譜，結(jié)果顯示三種小分子都導(dǎo)致胰蛋白酶紫外吸收的增強和峰的藍移。作用的時間差異并未像濃度變化那樣造成太大差異，這就提示生物堿小分子與胰蛋白酶的相互作用可能是瞬間完成

3、的。本文研究了三種生物堿與胰蛋白酶相互作用后的(300—400nm)熒光光譜，結(jié)果顯示三種小分子都導(dǎo)致胰蛋白酶熒光強度的增強和熒光峰的藍移(葛根素并未引起藍移)。根據(jù)SternVolmer方程，計算得出喜樹堿對胰蛋白酶的表觀淬滅常數(shù)Kq為035710“(mol／L)～s～，秋水仙堿對胰蛋白酶的表觀淬滅常數(shù)Kq為0434X10”(mol／L)一S～，葛根素的表觀淬滅常數(shù)Kq為04721013(mol／L)s一，遠大于淬滅荊對生物大分子的最

4、大擴散碰撞常數(shù)2010”(mol／L)～S一，推測三種生物堿對胰蛋白酶的熒光影響可能屬于靜態(tài)淬滅機制。比較喜樹堿在胰蛋白酶存在時和自由狀態(tài)下的熒光，發(fā)現(xiàn)后者反而強度高于前者，這就提示二者并未共價化合(否者會有能量轉(zhuǎn)移，喜樹堿在淬滅胰蛋白酶332nm熒光峰的同時自身450nm的熒光峰應(yīng)該比自由狀態(tài)下高)，而是以其他的方式形成了剛性的超分子復(fù)合物。在光譜分析的同時，定性考察了三種生物堿對胰蛋白酶酶學(xué)性質(zhì)的影響。結(jié)果都表現(xiàn)為抑制作用，葛根素使