27335.石斛constanslike基因的克隆與表達(dá)分析

1、CloningandExpressionAnalysisofCONSTANSlikeGinDendrobiumenesDendrobiumbShengpengZhangSupervisor：ProfessorJunDuanAthesissubmittedfortheDegreeofMaster(Doctorate)attheGraduateSchoolofTheChineseAcademyofSciencesDate摘要石斛CONSTA

2、NSlike基因的克隆與表達(dá)分析IYIlllll18I[15l7Illl3113114Ill摘要成花是大多數(shù)高等植物生活史中一個(gè)重要的由營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)轉(zhuǎn)向生殖生長(zhǎng)的復(fù)雜的發(fā)育過程。植物成花分子機(jī)理研究已在擬南芥等模式植物上取得了巨大進(jìn)展。石斛是一類重要的開花植物，具有很高的觀賞價(jià)值，是蘭科植物中栽培較為廣泛的種類之一，花期調(diào)控是其生產(chǎn)中的關(guān)鍵技術(shù)之一。光照是影響石斛蘭成花的重要因素。本文從美花石斛(DendrobiumloddigesiiRo

3、lfe)和秋石斛(Dendrobiumhybrida)中克隆了光周期調(diào)控途徑中的關(guān)鍵基因CONSTANSlike(COL)，并研究了這兩個(gè)基因在光周期途誘導(dǎo)下的表達(dá)情況。主要研究結(jié)果如下：1采用RTPCR和RACE相結(jié)合的方法，從美花石斛和秋石斛中克隆到光周期途徑的關(guān)鍵基因COL，分別命名為劇7C說(GU301089)和勵(lì)C阢(HM211083)。DICOL全長(zhǎng)gDNA為1082bp，其中包括一個(gè)978bp的開放閱讀框，編碼含有325個(gè)

4、氨基酸的蛋白，其DNA序列包含兩個(gè)外顯子和一個(gè)簡(jiǎn)單的一個(gè)104bp的內(nèi)含子。DhCOL全長(zhǎng)gDNA為1079bp，包括一個(gè)981bp的開放閱讀框，編碼含有326個(gè)氨基酸的蛋白，其DNA序列包含兩個(gè)外顯子和一個(gè)98bp的內(nèi)含子。2D1COL和DhCOL含兩個(gè)Bbox鋅指結(jié)構(gòu)域和一個(gè)CCT結(jié)構(gòu)域。氨基酸序列的同源性分析顯示DICOL和DhCOL與大麥的COL、水稻的Hdl、玉米COL、蝴蝶蘭的COL、擬南芥的AtCOLl和AtCO有較高的同

5、源性，其Bbox結(jié)構(gòu)域和CCT域的保守性更強(qiáng)。美花石斛和秋石斛的氨基酸序列同源性為92％。3采用同源克隆的方法，分別從美花石斛和秋石斛中得到了ACTIN基因eDNA片段，分別命名為刪C丁(GU301090)和D桕C丁(HM211084)。得到的DIACT和DhACTeDNA片段長(zhǎng)度均為1059bp。4對(duì)美花石斛和秋石斛進(jìn)行長(zhǎng)日照和短日照的光周期誘導(dǎo)，采用RealTimePCR技術(shù)分析DICOL移砒C現(xiàn)在不同光周期模式下的表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)