口蹄疫病毒VP1基因的序列分析及巢式PCR檢測(cè)研究.pdf

1、本文根據(jù)Genbank中注冊(cè)的O型口蹄疫病毒株VP1基因序列，設(shè)計(jì)出了一對(duì)引物，應(yīng)用RT-PCR方法對(duì)疑似口蹄疫病料進(jìn)行VP1基因的檢測(cè)，并對(duì)VP1基因進(jìn)行測(cè)序。結(jié)果表明，此口蹄疫病毒株的VP1基因的全長(zhǎng)639bp，編碼213個(gè)氨基酸，國(guó)內(nèi)外發(fā)表的O型毒株VP1基因核苷酸序列相比較的同源性在75.7-93.3％之間。VP1基因所推導(dǎo)氨基酸序列(1D蛋白)同源率在 5.0～92.5％之間。該病料株與臺(tái)灣和南通流行的O型口蹄疫病毒株親緣性最

2、近。對(duì)VP1基因的序列測(cè)定和分析，豐富了我國(guó)FMDV毒株VP1基因資料庫(kù)。 本研究在應(yīng)用RT-PCR對(duì)VP1基因的擴(kuò)增和測(cè)序的基礎(chǔ)上。選擇VP1基因內(nèi)相對(duì)保守的區(qū)域設(shè)計(jì)一對(duì)引物，建立檢測(cè)FMDV VP1基因的巢式PCR方法。通過(guò)對(duì)RT-PCR產(chǎn)物的二次擴(kuò)增，能特異性的檢測(cè)出500bp左右的目的片段。本試驗(yàn)所建立的巢式PCR方法特異性好，不與豬水泡病病毒、豬瘟病毒、豬圓環(huán)病毒、豬細(xì)小病毒出現(xiàn)交叉反應(yīng)。通過(guò)部標(biāo)RT-PCR方法和n