29857.魚(yú)類適應(yīng)性免疫系統(tǒng)的早期發(fā)生以及ikaros基因的克隆和表達(dá)

1、中國(guó)海洋大學(xué)博士學(xué)位論文魚(yú)類適應(yīng)性免疫系統(tǒng)的早期發(fā)生以及Ikaros基因的克隆和表達(dá)姓名：李風(fēng)鈴申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：海洋生物學(xué)指導(dǎo)教師：張士璀20090601中國(guó)海洋大學(xué)博士學(xué)位論文能力，其發(fā)育成熟的時(shí)間可能會(huì)稍早于之前認(rèn)為的46周。在本論文的第二部分，我們從重要的經(jīng)濟(jì)魚(yú)類半滑舌鰨中分離出了一個(gè)關(guān)鍵的血細(xì)胞分化相關(guān)因子Ikaros基因。Ikaros的eDNA全長(zhǎng)為1685bp，其開(kāi)放閱讀框?yàn)?290bp，編碼430個(gè)氨基酸。5’非編

2、碼區(qū)為24bp，3’非編碼區(qū)為371bp。用Ikaros基因的氨基酸序列與其他物種的Ikaros以及家族其他成員包括Helios、Aiolos和Eos的氨基酸序列構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)，發(fā)現(xiàn)半滑舌鰨中的Ikaros與包括青鯔、螄魚(yú)、虹鱒以及斑馬魚(yú)在內(nèi)的魚(yú)類展示了較近的親緣關(guān)系，在進(jìn)化樹(shù)中聚為一支。進(jìn)一步用部分物種lkaros的保守區(qū)進(jìn)行同源性比對(duì)，發(fā)現(xiàn)同源性較高的區(qū)域主要集中在N、C末端的鋅指結(jié)構(gòu)域。這同哺乳動(dòng)物中的研究結(jié)果是一致的，即N末端和

3、C末端的鋅指結(jié)構(gòu)在進(jìn)化過(guò)程中變化較小，保守性較強(qiáng)。我們又利用DNAstar中的CLUSTALW方法對(duì)Ikaros的氨基酸進(jìn)行了結(jié)構(gòu)上的相似度分析，結(jié)果與聚類分析一致，與青鯔、鯽魚(yú)、虹鱒以及斑馬魚(yú)相似度較高，分別達(dá)80O％、767％、667％以及573％。因?yàn)樵谄渌锓N早已證明Ikaros是調(diào)控免疫系統(tǒng)發(fā)生和發(fā)育的轉(zhuǎn)錄因子，為了驗(yàn)證它是否與免疫相關(guān)，我們首先利用實(shí)時(shí)定量RTPCR技術(shù)檢測(cè)了其在不同組織的表達(dá)情況。結(jié)果顯示，Ikaros基因

4、在半滑舌鰨中的胸腺、肝臟和脾中表達(dá)量較高，在腎臟、精巢和心臟中也有一定量的表達(dá)，而在腸、皮膚以及鰓中幾乎檢測(cè)不到或者表達(dá)量很低。這與美西螈、晶吻鰩和七鰓鰻中的檢測(cè)結(jié)果基本一致，這表明了半滑舌鰨中的Ikaros基因在主要的免疫器官中均有表達(dá)，在表達(dá)模式上也具有一定的保守性。這暗示我們，半滑舌鰨中的Ikaros可能與其他物種的Ikaros一樣，在免疫防御上具有一定的功能。我們從半滑舌鰨的頭腎中分離出巨噬細(xì)胞，進(jìn)行培養(yǎng)，然后用LPS或LTA對(duì)