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文檔簡介
1、東北農業(yè)大學碩士學位論文大豆遺傳轉化系統(tǒng)的建立與農桿菌介導Bt基因轉移的研究姓名:孔凡江申請學位級別:碩士專業(yè):農業(yè)昆蟲與害蟲防治指導教師:趙奎軍2002.11.1碩士學位論文摘要2002年11月EstablishmentofSoybeanGeneticTransfonllationSystemandStudyonBtGeneTransferWithAgrobacterium—mediatedMethodAbstractInthisre
2、search,tenvarietiesofsoybeanwerechosenandthecotyledonarynodesofthesevarietieswereusedtobethetargetexplantsofBtgeBetransformationThefactorsaffectingtheAgrobacteriummediatedtransformationandtheshootregenerationwerestudiedT
3、heresistantplantswereobtainedfromthetwostepsselectionFourpositiveplantswasobtainedSouthernanalysisshowthatBtgenewasintegratedintosoybean’sgenomeThemainresultsofthisresearchasfollows:1Therewerelargedifferencesofregenerati
4、onfrequencybetweensoybeangenotypesRegenerationfrequencywasbetween06504%in10soybeangenotypesthatwereusedinthisresearchTheresultSinthisresearchhasshownt11atregenerationfrequencywashighofHeinong35Hefeng35andHefeng25,whichwe
5、re6504%6402and6082%respect;elySothe3genetypeswerechosentobetheresearchmaterialsinthisstudy2TheconcentrationofBAandIBAwasdesignedasanalternationchangingatthedi行erentiationstagcoftheadventitiousshootfromcotyledonarynodeThe
6、suitableproportionbetweenBAandIBAfordifferentgenotypeswassceenedForHeinong35,whentheconcentraonofBAwas150mg/LandtheconeentrationofIBAwas020mg/L,thedjfrerentiationfrequenceisthehighestwith7857%ForHefeng25,whentheconcentra
7、tionofBAwas130mg/L,andtheconcentraionofIBAwas025mg/L,thedifierentiationfrequencyisthehighest4857%Withthesuitableproportion,theshootsofeachexplantswere7to10,notover10,whichisbenefitforelongationForHefen235,whentheconcentr
8、ationofBAwas120mg/L,andtheconcentrationofIBAwas025m“L,thedifferentiationfrequencyisthehighestwith7407%Theshootsofeachexplantswere4to93Thefrequencyofrootregeneraionwasremarkablyincreasedbytheadditionof1BAattherootregenera
9、tionstageThebasicmediumforrootregenefationwasl/2MSB,andtheconcentrationofsugarwas2%WhentheconcentrationofIBAwas20mg/LtherootregenerationfrequencyforHeinon935andHefeng25werehigherwith7188%and7241%respectivelyWhentheconcen
10、trationofIBAwas15mg/L,therootregenerationfrequencyforHefeng35werehigherwith6897%4TheselectfongenesofBtwereNPTII,andtheselectiveregeantwasKanThelateselectionwasusedtoovercomethedifficultyofadventitiousshootdifferentiation
11、andtherootregenerationWhentheshootswere03lcm,andbeforebeingtransferredtorootregenerationmedium,theshootswerescreenedwithKan,andthesuitableconcentrationofKanforHeinon935,Hefen935andHefen925waslOOmg/L5TheCefwasusedasantibi
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