發(fā)根農(nóng)桿菌介導的Bt基因Cry8e轉化大豆抗蠐螬研究.pdf

1、大豆既是糧食作物，又是經(jīng)濟作物，也是工業(yè)原料，是重要的植物蛋白資源和食用油料，但是大豆害蟲是影響大豆產(chǎn)量和質量的一個重要因素。為了防止蟲害大量的使用殺蟲劑，不僅對人和動物有害，也造成環(huán)境的污染。而且長期使用化學藥劑也易使害蟲產(chǎn)生抗藥性，從而降低防效，造成害蟲猖獗。
　　 金龜子類幼蟲——蠐螬是一類世界性難防治的重要地下害蟲，占地下害蟲總量的80％以上。據(jù)近年來的調查，蠐螬的危害已排在各類地下害蟲之首。因此，尋找抗金龜子類害蟲的B

2、t殺蟲蛋白基因并加以開發(fā)利用，生產(chǎn)生物工程殺蟲劑和轉基因植物，有效防治害蟲已成為有關國民經(jīng)濟健康發(fā)展的大事，利用轉基因技術使植物表達抗蟲基因防治害蟲則是綜合防治害蟲的重要途徑之一。
　　 大量研究表明，大豆是一種較難轉化的植物，而基因型是影響轉化效率的最主要因素之一。本研究利用發(fā)根農(nóng)桿菌介導的轉基因技術，對大豆不同基因型進行轉化比較，優(yōu)化轉化平臺，以期獲得轉化效率較高的轉化條件和基因型，為后期大豆整株轉化，獲得抗蠐螬轉基因植株打

3、下基礎。同時利用獲得陽性根進行分子檢測和生物活性檢測，均獲得較好結果。其主要工作結果如下：
　　 1．構建含Cry8e基因的植物表達載體pCAMBIA1305.1－35S-8e，利用農(nóng)桿菌介導轉化大豆，獲得轉基因發(fā)狀根。
　　 2．利用構建好的載體轉化十個不同基因型大豆，均獲得發(fā)狀根，但轉化效率差異顯著，吉林小粒轉化效率最高。
　　 3．從十個基因型中選取四個差異不顯著的基因型，分別進行光培養(yǎng)和暗培養(yǎng)，經(jīng)比較分析

4、發(fā)現(xiàn)兩種共培養(yǎng)方式，轉化效率均差異不顯著。
　　 4．從十個基因型中選取兩個基因型，分別選擇23℃、25℃、28℃進行共培養(yǎng)，結果發(fā)現(xiàn)，三個溫度條件下轉化效率差異不顯著。
　　 5．從十個基因型中選擇三個，分別在潮霉素濃度為10mg/L、12mg/L、14mg/L、16mg/L、18mg/L的梯度下進行篩選，結果發(fā)現(xiàn)，自貢冬豆和吉林小粒在10mg/L的時候陽性率最高，而中黃39在18mg/L時，陽性率最高，但總體差異性不