特種經(jīng)濟(jì)動(dòng)物抗CDV、CAV、CPV免疫球蛋白的制備與應(yīng)用.pdf

1、山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文特種經(jīng)濟(jì)動(dòng)物抗CDV、CAV、CPV免疫球蛋白的制備與應(yīng)用姓名：王玉燕申請學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：朱瑞良2002.6.1山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要特種經(jīng)濟(jì)動(dòng)物因?yàn)槠浔旧淼慕?jīng)濟(jì)價(jià)值很高，一旦發(fā)生傳染病損失慘重，因此有必要對(duì)患傳染病的動(dòng)物進(jìn)行治療和緊急預(yù)防，將損失降到最小。本課題研究探討如何能獲得大量高效價(jià)的抗犬瘟熱病毒(CDV)、細(xì)小病毒(CPV)和腺病毒(CAV)的直免血清和免疫璉蛋白，以控制相

2、應(yīng)傳染病的發(fā)生，為發(fā)病的動(dòng)物急救治療提供特效、安全的生物制劑。本研究共分三部分：試驗(yàn)一：藍(lán)狐抗CDV、CAV、CPV免疫球蛋白的制備。(本試驗(yàn)在兩個(gè)狐場進(jìn)行。共設(shè)計(jì)了針對(duì)三種主要疫病的9種免疫程序。各種免疫程序均在最后一次免疫的14天采血、分離血清。分別用微量中和試驗(yàn)測定血清中CDV的中和抗體效價(jià)，用血凝抑制試驗(yàn)測定血清中抗CAV、CPV的HI抗體效價(jià)。通過對(duì)各組的抗體效價(jià)進(jìn)行比較和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析的結(jié)果表明，在兩場的基礎(chǔ)免疫抗體水平無顯著差

3、異的基礎(chǔ)上，用CDV弱毒疫苗一次加強(qiáng)免疫與連續(xù)兩次以上大齊J量強(qiáng)化免疫的結(jié)果之間無顯著差異；CAV一次強(qiáng)化免疫的抗體的水平與3次連續(xù)強(qiáng)化免疫的無顯著差異；CPV組兩次強(qiáng)化免疫的結(jié)果要優(yōu)于聯(lián)苗2次免疫的結(jié)果。聯(lián)苗免疫組狐貍?cè)N抗體的整體水平較高，但是不如單苗免疫的高。因此制各抗血清的最佳免疫程序是，CDV、CAV在屠宰前兩周進(jìn)行一次強(qiáng)化免疫，CPV進(jìn)行兩次強(qiáng)化免疫。對(duì)分離到的血清用飽和硫酸銨鹽析法提取IgG，并用DEAE纖維素離子交換層析

4、法對(duì)提取的IgG進(jìn)行純化。用SDSPAGE進(jìn)行IgG的純度檢驗(yàn)，電泳結(jié)果出現(xiàn)兩條蛋白帶，是lgG的重鏈和輕鏈，說明純化的程度較高。將純化的IgG與提純的CDV、CAV病毒反應(yīng)后分別與膠體金標(biāo)記的SPA結(jié)合，在電鏡下可清楚地觀察到病毒與膠體金顆粒的結(jié)合，說明提取的lgG的效價(jià)、活性較高。提取的高免血清經(jīng)在臨床上應(yīng)用，結(jié)果表明CDV高免血清對(duì)發(fā)病初期的病犬有效，CPV高免血清對(duì)發(fā)病犬的治愈率可達(dá)875％。／，試驗(yàn)：藍(lán)狐抗CDV、CAV旦童籩

5、笠胄g(shù)制備。給別用CDV、CAV的疫苗免疫產(chǎn)蛋雞，每周檢測雞血清和卵黃中的抗體水平，收集抗體水平高的雞蛋用于提取純化卵黃抗體IgY。本試驗(yàn)中對(duì)不同稀釋倍數(shù)下卵黃抗體的提取產(chǎn)量進(jìn)行了比較研究。驗(yàn)證了卵黃液用pH50的10倍去離子水稀釋后的去脂率和IgV提取產(chǎn)量要高于其他稀釋方法。然后在此基礎(chǔ)上比較了7種不同提取卵黃抗體的方法。SDSPAGE和低壓層析的結(jié)果證明，用6％辛酸一硫酸銨法提取IgY的純度最好，其次是海藻酸鈉一硫酸銨法。獲得IgY

6、產(chǎn)量以海藻酸鈉一硫酸銨法最高，可達(dá)569mg／ml，其次是用3％辛酸一硫酸銨和聚乙二醇法。在各中方法中除6％辛酸法外，其他各種方法提取的IgY中都含有其他分子量的蛋白質(zhì)，體現(xiàn)了IgY的不均一性。通過綜合比較，認(rèn)為酸性條件下10倍去離子水稀釋卵黃液，離心后上清用007％的海藻酸鈉去脂，再IgG和雞高免血清和雞抗CI)V、c“卵黃的活性都較高，但提純的抗cAv的狐IgG和雞IgY的活性較高而提純的抗CDV的狐IgG和雞IgY的效價(jià)較低。朋—