抗仔豬腹瀉蛋黃免疫球蛋白的制備及其研究.pdf

1、腸毒素性大腸桿菌(ETEC)是引起仔豬腹瀉的主要病菌之一，現(xiàn)已分離鑒定的ETEC粘附因子有K88、K99、987P及F41等。本文將K88-K99-987P和K88-K99-F41分別與不同的佐劑(弗氏佐劑、白油佐劑、氫氧化鋁乳膠和磷酸緩沖鹽溶液)混合免疫產(chǎn)蛋雞，研究抗仔豬腹瀉蛋黃免疫球蛋白(IgY)的制備方法，對蛋黃中的IgY進行分離純化，并對IgY的生物活性及其特性進行了系統(tǒng)的研究。 本文采用能使大腸埃希氏菌K88、K99、

2、987P及F41菌株生產(chǎn)高單位纖毛抗原的Minca培養(yǎng)基，通過生長曲線的測定確定菌體最佳收集時間為12h。通過對蛋雞免疫后卵黃抗體活性的監(jiān)測，發(fā)現(xiàn)弗氏佐劑苗和白油苗可誘導機體產(chǎn)生持續(xù)、穩(wěn)定的高活性抗體。 確定了水稀釋法結(jié)合絮凝劑提取IgY的工藝路線，水溶性蛋白得率為84.47％。SDS-PAGE顯示IgY的相對分子質(zhì)量為188000左右，其輕鏈和重鏈的相對分子質(zhì)量分別為28400和66500左右。采用水稀釋→絮凝澄清→親和層析純

3、化IgY，得率為17.92％；采用水稀釋→絮凝澄清→硫酸銨沉淀→親和層析純化IgY，得率為16.43％。從一個雞蛋黃中提取的IgY約占整個雞蛋重量的1.22％。 用弗氏佐劑苗免疫產(chǎn)蛋雞得到的IgY-K88-K99-987P和IgY-K88-K99-F41的活性比對照組的提高5個滴度；用白油佐劑苗免疫產(chǎn)蛋雞得到的IgY-K88-K99-987P和IgY-K88-K99-F41的活性比對照組的提高4個滴度。 IgY的耐熱實驗

4、表明：純化的IgY和未純化的IgY其活性在20℃～50℃之間差別不大；當溫度繼續(xù)升高時，未純化的IgY的耐熱性要比純化的IgY的好。IgY的耐酸、堿實驗表明：溫度越高，IgY的耐酸、堿的能力越差，純化的IgY在60℃時對pH的變化要比20℃和37℃時敏感。37℃時，當pH在2.0～4.0和8.0～10.0之間時，其變化對未純化IgY活性的影響要比對純化的IgY的活性影響顯著。胃蛋白酶水解IgY的實驗表明：IgY耐受蛋白酶水解的能力和pH

5、有關。當pH在2.0和3.0時，胃蛋白酶對IgY的水解作用顯著；當pH為4.0～6.0時，胃蛋白酶對IgY的水解作用不顯著性。IgY體外抑菌實驗表明：當IgY的添加量在1～10mg/mL之間時，能夠抑制K88的生長繁殖，說明IgY可以和K88在體外結(jié)合。 體內(nèi)動物實驗表明：中、高劑量組復合蛋黃抗體粉對仔豬腹瀉的治療效果較好，治愈率達100％；低劑量組復合蛋黃抗體粉對仔豬腹瀉的治療效果較差，仔豬死亡率達50％；對照組仔豬死亡率達7