農(nóng)桿菌介導的西瓜遺傳轉(zhuǎn)化體系的研究.pdf

1、我國的西瓜年產(chǎn)量居世界首位，但因常規(guī)育種周期比較長，使西瓜的種質(zhì)創(chuàng)新與新品種的提供無法滿足市場需求。通過基因工程的方法來改良西瓜品質(zhì)，已成為一種選育西瓜新品種的有效途徑。近年隨著對類胡蘿卜素營養(yǎng)保健功能的廣泛認識，越來越多的學者對西瓜瓤中類胡蘿卜素組成及合成途徑進行深入研究，以期通過轉(zhuǎn)基因技術提高西瓜中類胡蘿卜素的含量，并進行種質(zhì)創(chuàng)新。本試驗建立西瓜子葉組織培養(yǎng)體系和子葉遺傳轉(zhuǎn)化體系，正是為要開展西瓜類胡蘿卜素基因工程及其代謝調(diào)控探究提

2、供技術保障。
　　試驗以西瓜子葉為外植體，研究子葉苗齡、不同激素濃度對子葉誘導分化影響以及再生條件，建立西瓜子葉離體高效組織培養(yǎng)體系。然后用西瓜子葉作為受體，研究預培養(yǎng)、農(nóng)桿菌侵染和共培養(yǎng)時間對抗性芽分化的影響，以及不同抗生素濃度對西瓜子葉生長情況的影響，建立農(nóng)桿菌介導的PSY基因遺傳轉(zhuǎn)化體系。
　　通過試驗，取得以下結果:
　　(1)建立了以西瓜子葉作為外植體的組織培養(yǎng)體系。通過對西瓜子葉組織培養(yǎng)幾個關鍵因素的試驗，

3、發(fā)現(xiàn)本試驗條件下適宜的培養(yǎng)條件為:子葉苗齡的適宜時間為4d，子葉苗齡較短和較長都不利于不定芽的分化，子葉在黑暗條件培養(yǎng)一段時間的分化率較高，適宜培養(yǎng)基為MS+6-BA2.0mg/L+IBA0.5mg/L+30g/L蔗糖+7g/L瓊脂和MS+6-BA2.0mg/L+IAA0.5mg/L+30g/L蔗糖+7g/L瓊脂。
　　(2)建立了農(nóng)桿菌介導的西瓜子葉遺傳轉(zhuǎn)化體系。以4d苗齡的子葉為受體，研究不同侵染時間(15，30，45，60m

4、in)、預培養(yǎng)時間(2，3d)、共培養(yǎng)時間(2，3，4d)對抗性芽分化的影響，也研究了抗生素(Kan、Amp、Cef)對西瓜子葉生長情況的影響。試驗發(fā)現(xiàn)75mg/L的Kan能夠很好的篩選出抗性芽，兩周之內(nèi)，200mg/L的Amp和400mg/L的Cef能夠較好的抑制農(nóng)桿菌大量的繁殖。預培養(yǎng)時間2d為宜，菌液侵染15min，接入MS+6-BA2.0mg/L+IBA0.5mg/L+Kan75mg/L+Amp200mg/L+30g/L蔗糖+7