農(nóng)桿菌介導(dǎo)的大白菜和菜心遺傳轉(zhuǎn)化體系的構(gòu)建.pdf

1、本試驗(yàn)以大白菜“北京80號(hào)”、“油青矮腳45天菜心”、“四季菜心王”為試材，以帶柄子葉為外植體，研究了不同基因型、苗齡、激素組合、預(yù)處理?xiàng)l件及瓊脂濃度對(duì)白菜類作物不定芽再生的影響，建立了白菜類作物較高再生頻率的再生體系。采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將質(zhì)粒pBⅠBast-gus-intro分別導(dǎo)入“油青矮腳45天菜心”、“四季菜心王”，利用GUS組織染色分析法研究了根癌農(nóng)桿菌菌液濃度、侵染時(shí)間、預(yù)培養(yǎng)時(shí)間和共培養(yǎng)時(shí)間等因素對(duì)菜心帶柄子葉遺傳轉(zhuǎn)化的影響

2、，探討了適宜菜心遺傳轉(zhuǎn)化的膦化麥黃酮、卡那霉素和抑菌抗生素的使用濃度，優(yōu)化了農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化體系。以建立的遺傳轉(zhuǎn)化體系為基礎(chǔ)，采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將不育基因orf138和orf222導(dǎo)入菜心。主要研究結(jié)果如下：
　　 1.建立了白菜類作物子葉高頻再生體系：‘北京80號(hào)’的最佳培養(yǎng)基為MS+5mg/L6-BA+0.5mg/LNAA+2mg/LAgNO3，再生頻率為84.1％；“油青矮腳45天菜心”和“四季菜心王”的最佳培養(yǎng)基為MS

3、+0.2mg/LTDZ+1mg/LNAA+2mg/LAgNO3，再生頻率分別為73.1％和83.2％。三個(gè)基因型的帶柄子葉在0.5～1mg/L2，4-D中預(yù)處理3d，再生頻率達(dá)84％以上。4～5d苗齡的外植體誘導(dǎo)不定芽效果較好。瓊脂的濃度以12g/L為宜。
　　 2.優(yōu)化了農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化體系：菜心轉(zhuǎn)化過程中以膦化麥黃酮和卡那霉素為篩選劑，最適濃度分別為10mg/L和8mg/L；抑菌劑選用500mg/L的羧芐青霉素；用OD6