新城疫病毒F基因與雞IL-2重組DNA疫苗的研究.pdf

1、東北農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文新城疫病毒F基因與雞IL2重組DNA疫苗的研究姓名：姜永厚申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：基礎(chǔ)獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：劉忠貴2000.5.1東北農(nóng)業(yè)大學(xué)中文摘要博士學(xué)位論文胞的增殖、分化，增強(qiáng)細(xì)胞免疫應(yīng)答；另一方面作用B細(xì)胞，促進(jìn)其活化分泌Ig，加速抗體生成，進(jìn)而加強(qiáng)體液免疫。3新城疫病毒F基因與雞Ⅱ，2重組DNA疫苗的研究利用國內(nèi)首次克隆得到的雞IL2與新城疫弱毒D26株的F基因，經(jīng)載體改建將二者以非融合表達(dá)形式共同克隆于真核

2、表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3上經(jīng)酶切分析、PCR鑒定證實(shí)成功構(gòu)建了共表達(dá)雞IL2與新城疫F蛋白的重組質(zhì)粒(pcDNAFIL2)。采用胸肌多點(diǎn)注射方法接種14日齡SPF雛雞免疫后每周采集試驗(yàn)雞胸腺、法氏囊、血液，無菌分離T、B淋巴細(xì)胞和血清，以MTT法和ELISA分別檢測免疫雞T、B淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)和抗體變化規(guī)律。結(jié)果顯示：與單獨(dú)接種F基因疫苗試驗(yàn)組相比接種重組質(zhì)粒試驗(yàn)組雞只的體液免疫和細(xì)胞免疫均明顯增強(qiáng)；且免疫效果優(yōu)于兩種質(zhì)粒的混合注射。免疫后

3、以新城疫標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)毒F。毛攻擊，接種重組質(zhì)粒試驗(yàn)雞有70％存活：混合接種F基因和IL2質(zhì)粒試驗(yàn)雞有5【J％存活；單獨(dú)接種F基因疫苗試驗(yàn)雞只有30％存活。試驗(yàn)結(jié)果表明共表達(dá)IL2可極大提高新城疫DNA疫苗的效力。新城疫F基因與雞IL。2重組質(zhì)粒的成功構(gòu)建在國內(nèi)外尚來見報道，不僅首次證實(shí)了雞IL2在新城疫基因免疫中的免疫增強(qiáng)作用而且為雞IL2這一新型佐劑在禽類基因免疫中的應(yīng)用提供了試驗(yàn)依據(jù)。同時也為探討禽類重組基因疫苗的構(gòu)建奠定了基礎(chǔ)。4新城疫

4、基因疫苗、雞幾2質(zhì)粒免疫SPF雛雞免疫器官的組織學(xué)變化新城疫基因疫苗免疫后，試驗(yàn)雞胸腺皮質(zhì)增厚其中淋巴細(xì)胞數(shù)目增多。法氏囊淋巴濾泡明顯增大，淋巴細(xì)胞數(shù)目增多。脾臟白髓區(qū)增大淋巴小結(jié)數(shù)量增多，體積增大，其中淋巴細(xì)胞數(shù)量增多。以上主要免疫器官在免疫后的組織學(xué)變化再次證實(shí)了基因疫苗免疫可以誘導(dǎo)體液免疫和細(xì)胞免疫的結(jié)論。另外將IL2免疫雞與空白對照雞、F基因疫苗免疫雞進(jìn)行了形態(tài)學(xué)和組織學(xué)的比較，接種IL2質(zhì)粒試驗(yàn)雞剖檢未見病理變化：整個免疫過程