西芹浸提液處理后黃瓜枯萎病菌弱毒菌株的篩選及其誘導(dǎo)抗性研究.pdf

1、由黃瓜枯萎病菌（Fusarium oxysporum f.sp.cucumerinum）侵染而引起的黃瓜枯萎病，是世界性的根際土傳病害，一般年限發(fā)病率為10～30%，給黃瓜生產(chǎn)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。采用化學(xué)藥劑進(jìn)行防治會(huì)帶來(lái)“3R”問(wèn)題，且污染環(huán)境。嫁接換根雖說(shuō)可以從根本上防治枯萎病，但是由于嫁接技術(shù)相對(duì)有難度，嫁接后管理繁瑣，嫁接后黃瓜品質(zhì)下降等原因?qū)е聦?shí)際生產(chǎn)中推廣面積有限。利用黃瓜枯萎病菌弱毒菌株的誘導(dǎo)抗病性技術(shù)進(jìn)行防治已經(jīng)成為新

2、的病害控制措施。
　　本實(shí)驗(yàn)在培養(yǎng)基條件下，用西芹鮮根、鮮根際區(qū)物及種子的丙酮、乙醇和蒸餾水浸提液對(duì)黃瓜枯萎病菌分別進(jìn)行處理1代和每代處理而后連續(xù)培養(yǎng)，每1代均測(cè)定不同處理病菌的菌落直徑及其田間致病力，用以篩選黃瓜枯萎病菌的弱毒菌株。與此同時(shí)，測(cè)定每1代不同處理病菌分泌的毒素—鐮刀菌酸含量及細(xì)胞壁降解酶活性，用以研究不同西芹鮮根物質(zhì)及種子的浸提液對(duì)黃瓜枯萎病菌的致弱作用機(jī)理。隨后用篩選到的黃瓜枯萎病菌弱毒菌株作為誘導(dǎo)物進(jìn)行了黃瓜枯

3、萎病誘導(dǎo)抗性的研究。主要結(jié)果如下：
　　1.50 mg·mL-1的西芹鮮根、根際區(qū)物及種子的丙酮、乙醇、蒸餾水浸提液分別處理1代后，不同處理均表現(xiàn)為第1代枯萎病菌的直徑受抑制作用最強(qiáng)，以后隨著繼代培養(yǎng)代數(shù)的增加，各處理與其對(duì)照間差異不顯著，抑制作用逐漸減小。鮮根、根際區(qū)物及種子的3種浸提液對(duì)黃瓜枯萎病菌的致病力有致弱作用，各處理的病情指數(shù)隨著繼代培養(yǎng)代數(shù)的增加，表現(xiàn)為先減小后增大。至第6代時(shí)，西芹鮮根丙酮、乙醇、蒸餾水浸提液處理的

4、病情指數(shù)分別為27.5、29.2和28.3；西芹根際區(qū)物丙酮、乙醇、蒸餾水浸提液處理的病情指數(shù)分別為28.3、27.5和28.3；西芹種子丙酮、乙醇、蒸餾水浸提液處理的病情指數(shù)分別為29.2、28.3和28.3。實(shí)驗(yàn)通過(guò)西芹鮮根、根際區(qū)物、種子的3種浸提液1代處理后，繼代培養(yǎng)6代未能獲得黃瓜枯萎病菌的弱毒菌株。
　　2.50 mg·mL-1的西芹鮮根、根際區(qū)物及種子的丙酮、乙醇、蒸餾水浸提液分別每代處理黃瓜枯萎病菌后，其中丙酮、乙

5、醇浸提液處理對(duì)繼代培養(yǎng)第1～5代黃瓜枯萎病菌具有化感抑制作用，而蒸餾水浸提液處理對(duì)繼代培養(yǎng)第1～5代病菌的生長(zhǎng)既表現(xiàn)為抑制作用又表現(xiàn)為促進(jìn)作用。鮮根、根際區(qū)物及種子的3種浸提液對(duì)繼代培養(yǎng)第1～5代黃瓜枯萎病菌的致病力具有致弱作用，且隨繼代培養(yǎng)代數(shù)的增加，不同處理病菌的致病力表現(xiàn)為逐漸降低。至第5代時(shí)，西芹鮮根丙酮浸提液處理的致病力為0，根際區(qū)物乙醇浸提液處理的致病力為6.7%，種子乙醇浸提液處理的致病力為3.3%，實(shí)驗(yàn)通過(guò)西芹鮮根丙酮、

6、根際區(qū)物乙醇和種子乙醇浸提液的每代處理篩選到了3株黃瓜枯萎病菌的弱毒菌株。
　　3.50 mg·mL-1的西芹鮮根、根際區(qū)物及種子的丙酮、乙醇、蒸餾水浸提液處理1代對(duì)第1～6代黃瓜枯萎病菌分泌的鐮刀菌酸含量具有減小作用。不同浸提液處理抑制黃瓜枯萎病菌分泌果膠酶、纖維素酶能力逐漸減小。西芹鮮根物質(zhì)及種子浸提液處理1代后，不同處理黃瓜枯萎病菌分泌的鐮刀菌酸含量及纖維素酶活性同其致病力均表現(xiàn)為極顯著正相關(guān)。50 mg·mL-1的西芹鮮根

7、、根際區(qū)物及種子的丙酮、乙醇、蒸餾水浸提液每代處理顯著抑制第1～5代黃瓜枯萎病菌鐮刀菌酸的產(chǎn)生，顯著降低果膠酶、纖維素酶、β-葡萄糖苷酶活性的積累，即對(duì)黃瓜枯萎病菌產(chǎn)毒素和產(chǎn)細(xì)胞壁降解酶的能力具有致弱作用。西芹鮮根物質(zhì)及種子的浸提液每代處理后，不同處理黃瓜枯萎病菌的致病力同其繼代培養(yǎng)過(guò)程中分泌的鐮刀菌酸含量、纖維素酶活性及β-葡糖糖苷酶活性呈極顯著正相關(guān)。低鐮刀菌酸含量、低果膠酶活性可作為篩選黃瓜枯萎病菌弱毒菌株的輔助指標(biāo)。
　　

8、4.實(shí)驗(yàn)篩選的黃瓜枯萎病菌弱毒菌株FOC-RA-5、FOC-SE-5和FOC-RSE-5的致病力具有很好的穩(wěn)定性。弱毒菌株FOC-RA-5可顯著激發(fā)黃瓜對(duì)枯萎病的抗性，表現(xiàn)為黃瓜枯萎病的發(fā)病率比對(duì)照一定程度上降低。采用浸根和蘸胚根的誘導(dǎo)方法優(yōu)于灌根、注射、噴霧處理，挑戰(zhàn)接種后15 d，兩種方法的相對(duì)防效仍在50%以上，是最佳誘導(dǎo)方法。誘導(dǎo)物濃度越高，相對(duì)防治效果越顯著，1.0×107個(gè)·ml-1是最佳誘導(dǎo)接種濃度；中等濃度挑戰(zhàn)物處理，相