紅橘優(yōu)系遺傳鑒定及起源研究.pdf

1、柑橘不僅是世界第一大果樹(shù)，還是我國(guó)第二大水果，據(jù)統(tǒng)計(jì)數(shù)字顯示中國(guó)柑橘產(chǎn)量位居世界第一。中國(guó)作為柑橘重要的原產(chǎn)中心之一，擁有豐富的柑橘資源。紅橘作為我國(guó)的傳統(tǒng)柑橘資源與其它寬皮柑橘相比，其鮮艷的果皮色澤成為其發(fā)展的優(yōu)勢(shì)之一，然而我國(guó)傳統(tǒng)紅橘存在果實(shí)種子多，熟期集中，果實(shí)有異味，不耐儲(chǔ)藏等缺點(diǎn)，其種植面積呈逐年減少的趨勢(shì)，反之國(guó)外紅橘品種種植面積不斷加大。在此情況下選育少核，熟期分散，無(wú)異味或異味小，耐貯藏的紅橘品種，不僅能豐富柑橘消費(fèi)市場(chǎng)

2、的品種還對(duì)我國(guó)紅橘資源資源的開(kāi)發(fā)利用與保存具有重要意義。本研究通過(guò)三種分子標(biāo)記的方法，對(duì)在湖北荊門(mén)發(fā)現(xiàn)的少核，易化渣，異味小的紅橘優(yōu)系進(jìn)行了遺傳鑒定，對(duì)收集的紅橘資源親緣關(guān)系進(jìn)行了研究，不僅為紅橘優(yōu)系品種鑒定與審核提供了重要依據(jù)，還為我國(guó)紅橘資源的收集與保存提供了重要的理論基礎(chǔ)。
　　 本研究主要內(nèi)容包括：⑴對(duì)紅橘優(yōu)系及收集的部分材料的單果重、縱橫徑、可固、Vc、囊瓣數(shù)、種子數(shù)及種子胚的特性進(jìn)行了測(cè)定，并進(jìn)行了分析比較。結(jié)果表明

3、:與古老紅橘、朱橘相比，具有單果種子少，口感優(yōu)良，化渣程度好，異味小等優(yōu)良特性。并且收集的寬皮柑橘類資源中除克里曼丁種子具有單胚性，其余包括25份紅橘和朱橘在內(nèi)的27份材料均具有多胚的特性。⑵通過(guò)23對(duì)SRAP(sequence-related amplified polymorphism)引物對(duì)包括25份紅橘在內(nèi)的27份材料的遺傳關(guān)系進(jìn)行研究，統(tǒng)計(jì)擴(kuò)增得到的清晰且具有多態(tài)性的條帶，最終27份樣品材料共得到399條多態(tài)性條帶，平均每對(duì)引

4、物擴(kuò)增出的條帶數(shù)為17.3。采用UPGMA(unweighted pair-group method，arithmetic)聚類，構(gòu)建親緣關(guān)系樹(shù)圖。結(jié)果顯示紅橘優(yōu)系與浙江衢州的滿頭紅親緣關(guān)系最近，遺傳相似性系數(shù)為0.992。且紅橘優(yōu)系亞組里面還包含少核朱紅橘母樹(shù)、少核朱紅橘和秭歸紅橘1，遺傳相似性系數(shù)都很高。⑶對(duì)收集的包括25份紅橘在內(nèi)的32份樣品材料進(jìn)行AFLP分析，從98對(duì)AFLP（amplified fragment length

5、 polymorphism）引物中得到11對(duì)擴(kuò)增效果好的AFLP引物，經(jīng)AFLP標(biāo)記得到317條多態(tài)性條帶，平均每對(duì)引物擴(kuò)增得到28.8條多態(tài)性條帶。紅橘優(yōu)系與浙江衢州滿頭紅的相似性系數(shù)為0.993，而未找出紅橘優(yōu)系與10號(hào)少核朱紅橘的差異，這可能與引物的選擇有關(guān)。對(duì)紅橘優(yōu)系與浙江衢州的滿頭紅的差異片段進(jìn)行回收、測(cè)序和BLAST比對(duì)分析，最終得到長(zhǎng)度分別為105bp、142bp、157bp的三個(gè)序列。105bp的序列與中國(guó)甜橙的一個(gè)Co

6、pia反轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子Tcs2的相似度達(dá)97％。來(lái)自兩對(duì)不同引物組合擴(kuò)增得到的142bp和157bp的序列分別以99％和100％的相似性與甜橙的一段長(zhǎng)為160129bp的葉綠體基因比對(duì)上。⑷篩選了50對(duì)SSR(simple sequence repeat)引物，最終得到14對(duì)擴(kuò)增效果好的引物，在32份材料中擴(kuò)增產(chǎn)生了137條多態(tài)性條帶，平均每對(duì)引物產(chǎn)生9.8條多態(tài)性位點(diǎn)。SSR標(biāo)記能把材料里的橘類、橙類、柚類很好的區(qū)分開(kāi)來(lái)，但在區(qū)分同一亞組

7、的材料時(shí)表現(xiàn)區(qū)分效果差，且沒(méi)有發(fā)現(xiàn)紅橘優(yōu)系與浙江衢州滿頭紅的差異條帶。⑸三種標(biāo)記聚類的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)基本一致，且三種標(biāo)記結(jié)果共同說(shuō)明了紅橘優(yōu)系與浙江衢州滿頭紅、少核朱紅橘、秭歸紅橘l的親緣關(guān)系較近。三種標(biāo)記結(jié)果的比較分析顯示三種標(biāo)記在區(qū)分水平上存在差異，且AFLP和SRAP在區(qū)分親緣關(guān)系較近的物種上優(yōu)于SSR。由于每種標(biāo)記有其優(yōu)缺點(diǎn)，因此為更加真實(shí)的反應(yīng)材料間親緣關(guān)系的遠(yuǎn)近，綜合多種分子標(biāo)記和應(yīng)用更多的引物組合進(jìn)行親緣關(guān)系的研究是很有必要的。