IBV分離株GX-YL5感染對雞氣管黏膜和哈德氏腺免疫功能影響的研究.pdf

1、雞傳染性支氣管炎(Infectious bronchitis，IB)是由冠狀病毒雞傳染性支氣管炎病毒(Infectious bronchitis virus，IBV)引起的一種急性高度接觸傳染性呼吸道疾病，給養(yǎng)禽業(yè)帶來嚴重的經(jīng)濟損失。IBV是典型的嗜黏膜病原，主要通過呼吸道黏膜途徑感染機體。黏膜免疫可誘導(dǎo)局部黏膜免疫和誘導(dǎo)全身免疫，在抗IBV感染免疫應(yīng)答中發(fā)揮非常重要的作用。禽類的氣管黏膜和哈德氏腺是黏膜免疫系統(tǒng)的重要組成部分，因此研究

2、IBV感染對氣管黏膜和哈德氏腺免疫功能的影響非常重要。
　　 本研究采用IBV廣西分離株GX-YL5人工感染免疫雞和非免疫雞，應(yīng)用實時熒光定量RT-PCR方法檢測不同時相氣管黏膜和哈德氏腺中與天然免疫相關(guān)的部分模式識別受體（TLR2、TLR3、TLR6和TLR7）和細胞因子(IFN-α、IFN-β、Mx、IL-6、IL-10、IL-1β、MMP3、MIP-1β、CXCR4和CCR6)的mRNA轉(zhuǎn)錄水平與IBV病毒載量動態(tài)，同時使

3、用ELISA檢測氣管黏膜和哈德氏腺分泌型免疫球蛋白A(sIgA)和血清IgG抗體，旨在從分子水平探究IBV對雞氣管黏膜和哈德氏腺免疫功能的影響，為闡明IBV的分子致病機制奠定基礎(chǔ)。
　　 實驗結(jié)果顯示:在感染早期（14DPI前），攻毒組和免疫攻毒組氣管黏膜和哈德氏腺TLR2、TLR3、TLR6和TLR7的mRNA表達水平在大部分時間點都出現(xiàn)了不同程度的上調(diào)，氣管黏膜TLR2、TLR3、TLR6和TLR7整體上比同組哈德氏腺上調(diào)表

4、達明顯。攻毒14天后，攻毒組和免疫攻毒組哈德氏腺與氣管黏膜所檢測TLRs表達水平已逐漸下調(diào)或恢復(fù)正常水平。揭示氣管黏膜和哈德氏腺TLR2、TLR3、TLR6和TLR7參與了IBV感染早期的免疫應(yīng)答，表明了IBV感染對宿主的天然免疫應(yīng)答具有明顯影響。
　　 在感染早期（14DPI前），攻毒組氣管黏膜IFN-β、IL-6、IL-10、IL-1β、CXCR4、CCR6和MMP3比同組哈德氏腺相同基因表達上調(diào)更明顯;免疫攻毒組氣管黏膜I

5、FN-α、IFN-β、Mx、IL-6、IL-10、IL-1β和CCR6比同組哈德氏腺相同基因上調(diào)表達明顯;攻毒組氣管黏膜Mx(8DPI前)、IFN-β(3DPI)和IL-10(5DPI)比免疫攻毒組氣管黏膜相同基因上調(diào)更顯著;攻毒組哈德氏腺Mx(1DPI)、IFN-β(8DPI)、IL-10(5DPI)和CCR6(1DPI)與免疫攻毒組哈德氏腺相同基因表達差異明顯。攻毒14天后，上述細胞因子在攻毒組和免疫攻毒組哈德氏腺與氣管黏膜表達水平

6、已逐漸下調(diào)或恢復(fù)正常水平，表明了IBV感染早期多種細胞因子參與了抗IBV感染免疫應(yīng)答，但對IBV感染的免疫應(yīng)答程度因細胞類型及宿主免疫狀態(tài)差異而不同。
　　 攻毒組和免疫攻毒組氣管黏膜病毒載量分別在攻毒后3天和攻毒后5天達到峰值，攻毒組和免疫攻毒組哈德氏腺病毒載量均在攻毒后3天達到峰值，攻毒組和免疫攻毒組氣管黏膜和哈德氏腺在攻毒后1天至8天都保持較高的病毒載量，隨后隨時間的推移病毒含量逐漸減少。整體上攻毒組氣管黏膜和哈德氏腺比免

7、疫攻毒組相同組織的病毒載量高，攻毒組和免疫攻毒組哈德氏腺病毒載量消長情況與它們的氣管黏膜病毒載量變化趨勢基本呈正相關(guān)性。結(jié)果證實了IBV GX-YL5可在氣管黏膜和哈德氏腺中復(fù)制，感染雞氣管黏膜和哈德氏腺病毒載量與雞的臨床表現(xiàn)存在時間相關(guān)性。同時，感染雞氣管黏膜和哈德氏腺病毒載量和相應(yīng)組織的TLRs和細胞因子mRNA表達水平整體上也呈現(xiàn)一定的相關(guān)性。
　　 在所檢測時間點中，只發(fā)現(xiàn)攻毒組氣管洗液sIgA在5DPI和8DPI、免疫

8、攻毒組氣管洗液sIgA在8DPI，與哈德氏腺sIgA在1DPI與5DPI出現(xiàn)顯著上調(diào)(P＜0.05)外，其它時間點與對照組相比差異均不顯著。免疫攻毒組血液中特異性IgG抗體產(chǎn)生非常迅速，在攻毒后3天抗體水平就開始明顯升高，直到攻毒后14天達到高峰，在攻毒后28天仍維持較高的抗體水平;攻毒組在攻毒后5天才出現(xiàn)抗體升高的趨勢，在攻毒后14天達到高峰，同樣至攻毒后28天仍維持較高的抗體水平。結(jié)果提示IBV GX-YL5刺激雞體氣管黏膜和哈德氏