中國(guó)恒河猴在SIVmac239小劑量多次直腸黏膜暴露中的保護(hù)機(jī)制研究.pdf

1、艾滋病不典型疾病進(jìn)程中的免疫保護(hù)機(jī)制一直都是人們關(guān)注的焦點(diǎn)。細(xì)胞免疫、中和抗體等在建立機(jī)體感染的患者中發(fā)揮的抗病毒作用都十分有限[1]。本研究將重點(diǎn)放在B細(xì)胞及其介導(dǎo)的早期體液免疫反應(yīng)及固有免疫的重要組份B1細(xì)胞上，研究其分泌的特異性和非特異性IgM抗體在SIVmac239直腸感染猴不同疾病進(jìn)程中的變化規(guī)律，以期發(fā)現(xiàn)其中的免疫保護(hù)機(jī)制，為艾滋病感染機(jī)體機(jī)制、疫苗的研發(fā)提供有益的借鑒。
　　 本研究使用8只正常中國(guó)恒河猴，應(yīng)用SI

2、Vmac239中國(guó)恒河猴細(xì)胞適應(yīng)株通過直腸途徑感染實(shí)驗(yàn)猴。為了更好地模擬HIV在人群中自然傳播方式，使用小劑量多次的感染方式，平均一周感染兩次。分別在SIVmac239感染后不同時(shí)間點(diǎn)收集血清、EDTA抗凝血、十二指腸粘膜組織以及直腸沖洗液等樣品，進(jìn)行T、B淋巴細(xì)胞亞群及抗體水平的檢測(cè)。病毒載量等實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在SIVmac239病毒感染后出現(xiàn)了三種感染情況——典型疾病進(jìn)展型、延遲進(jìn)展型以及隱匿型。典型疾病進(jìn)展組和部分延遲進(jìn)展感染猴中，

3、在感染早期就出現(xiàn)了明顯的B細(xì)胞數(shù)量下降，提示這種變化與疾病進(jìn)程之間的關(guān)系是值得關(guān)注的。
　　 所有8只實(shí)驗(yàn)猴外周血中記憶性B細(xì)胞在SIVmac239感染過程中均呈現(xiàn)逐漸下降的趨勢(shì)，但在腸粘膜固有層中則相反。這種變化在不同個(gè)體之間變化幅度無明顯差異，與疾病進(jìn)程之間無相關(guān)性。同樣發(fā)現(xiàn)，與疾病進(jìn)程無相關(guān)性的是IgM+記憶性B淋巴細(xì)胞，暴露后它在外周血和腸粘膜中比例都有所增加，且這種變化與IgM抗體產(chǎn)生的時(shí)間點(diǎn)一致，表明在SIV感染的早

4、期，IgM+記憶性B淋巴細(xì)胞接受抗原刺激活化，且這種激活與后續(xù)的感染進(jìn)程無關(guān)，是單純的免疫激活過程。
　　 在感染早期腸粘膜和外周血中B1細(xì)胞，主要為B1a細(xì)胞比例顯著升高，腸粘膜中B1細(xì)胞增加的幅度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于外周血。黏膜中B1a細(xì)胞的比例在三組不同的感染模式中表現(xiàn)出顯著性差異，提示B1a細(xì)胞比例的變化與疾病進(jìn)程之間存在密切的關(guān)系。同期在粘膜局部檢測(cè)到非特異性IgM抗體水平與疾病進(jìn)程呈負(fù)相關(guān)，進(jìn)一步證明在粘膜局部能早期誘導(dǎo)較強(qiáng)的B

5、1，主要是B1a細(xì)胞增殖，分泌非特異性IgM抗體，推測(cè)可以在早期抑制病毒的入侵。
　　 SIV感染能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗SIV特異性IgM和IgG抗體。通常IgG抗體產(chǎn)生的時(shí)間晚于病毒載量高峰出現(xiàn)的時(shí)間，表明抗SIV特異性IgG抗體不能在感染早期及時(shí)有效地控制病毒的復(fù)制。本研究發(fā)現(xiàn)，特異性IgM抗體能在早期產(chǎn)生。雖然外周血中水平相對(duì)較低，但抗體水平和疾病進(jìn)程之間也顯示負(fù)相關(guān)性，表明特異性IgM抗體可能在早期抗感染過程中起到一定作用。<

6、br>　　 綜上所述，在SIV感染早期，B細(xì)胞活化分泌抗SIV特異性IgM抗體參與機(jī)體的抗感染免疫。固有免疫中的B1細(xì)胞，主要是B1a細(xì)胞接受抗原刺激后分泌非特異性IgM抗體，在早期粘膜局部抗SIV感染過程中發(fā)揮重要作用，能在很大程度上影響疾病的進(jìn)程。
　　 最后，本研究還用抗人B淋巴細(xì)胞單克隆抗體(利妥昔單抗注射液，Rituximab)通過靜脈滴注的方法敲除中國(guó)恒河猴體內(nèi)B淋巴細(xì)胞，定期采集外周血、腹股溝淋巴結(jié)和十二指腸黏膜