SIVmac239感染中國恒河猴的研究.pdf

1、人類免疫缺陷病毒(HumanImmunodeficiencyVirus，HIV)的傳播在全球范圍內(nèi)導(dǎo)致了巨大的災(zāi)難，然而至今為止，尚沒有一種艾滋病疫苗被證明能夠有效地預(yù)防HIV的感染?，F(xiàn)在普遍認(rèn)為，艾滋病疫苗的研究應(yīng)該回歸到基礎(chǔ)研究；而動(dòng)物模型的不足，已日漸成為相關(guān)研究的瓶頸。
　　 由于HIV-1不能感染嚙齒類及小型非人靈長類動(dòng)物并導(dǎo)致疾病，科學(xué)家們曾經(jīng)一度嘗試采用嵌載HIV基因的猴免疫缺陷病毒(SIV)（簡稱SHIV）感染恒

2、河猴為模擬模型。可是，近來科學(xué)家們開始質(zhì)疑該模型的可信度，因?yàn)樵诓捎肧HIV感染猴模型研發(fā)中確立有效的預(yù)防性HIV疫苗已在高危人群中經(jīng)臨床試驗(yàn)證實(shí)無效。因而，現(xiàn)今被廣泛認(rèn)可的動(dòng)物模型仍為SIV感染恒河猴的自然替代模型。其中最為常用的是印度恒河猴模型。但與HIV-1感染人類相比較，此模型的特點(diǎn)為發(fā)病迅速、血漿病毒載量高、抗體反應(yīng)弱，只能部分反映人類HIV-1感染病程，從而限制了該模型的廣泛應(yīng)用。因此，近年來國際學(xué)界嘗試采用中國恒河猴作為艾

3、滋病模型，初期結(jié)果提示，中國恒河猴可能成為更好的動(dòng)物模型，模擬人類HIV感染的病理進(jìn)程[1-3]。但由于采用相關(guān)研究較少，對(duì)模型的特點(diǎn)掌握不充分，導(dǎo)致其推廣應(yīng)用尚缺乏必要的理論基礎(chǔ)。另一方面，感染毒株對(duì)模型的牛物學(xué)特性也有很大的影響，例如廣泛使用的SIVmac251，可導(dǎo)致感染動(dòng)物在病毒學(xué)、免疫學(xué)和疾病進(jìn)程等指標(biāo)上存在極大的個(gè)體差異[1]，增加了分析的難度與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的成本。
　　 本研究采用分子克隆的標(biāo)準(zhǔn)毒株SIVmac239作

4、為感染毒株，以來源于中國廣西南部、屬于指名亞種的中國恒河猴作為模型動(dòng)物，經(jīng)靜脈途徑、直腸途徑和陰道途徑接種了31只中國恒河猴，對(duì)感染后實(shí)驗(yàn)猴的臨床表現(xiàn)、血漿病毒載量、CD4+T細(xì)胞數(shù)、疾病進(jìn)展情況進(jìn)行了長達(dá)兩年的觀察與較為詳細(xì)的分析。此外，還對(duì)部分猴的活檢淋巴結(jié)及死亡猴的尸檢取材進(jìn)行了病理學(xué)檢查，以及對(duì)病毒envV1/V2區(qū)在進(jìn)展成為AIDS過程中不同時(shí)間點(diǎn)的基因變異的情況進(jìn)行了測定與分析。最后，在掌握SIVmac239感染中國恒河猴模

5、型生物學(xué)特性的基礎(chǔ)上，與研究報(bào)道中常用模型的各項(xiàng)參數(shù)進(jìn)行比較，分析此模型的優(yōu)越性與應(yīng)用前景。
　　 以上研究的主要結(jié)果有：SIVmac239感染的中國恒河猴模型①血漿病毒載量的變化規(guī)律大致與HIV-1感染及現(xiàn)有的SIV猴模型一致；而高峰、平臺(tái)期的病毒載量在數(shù)值上與HIV-1感染后更為接近；②CD4+T細(xì)胞數(shù)持續(xù)緩慢下降，下降速度與HIV-1感染導(dǎo)致的CD4+T細(xì)胞減少可比性較好；③生物學(xué)特性穩(wěn)定，病毒、免疫學(xué)指標(biāo)個(gè)體間差異小，尤

6、其是靜脈感染組，較少動(dòng)物即可得出有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的結(jié)果；④疾病進(jìn)展的速度適宜，快速進(jìn)展型與進(jìn)展型所占的比例與疾病進(jìn)展速度與HIV-1感染的可比性較好，反應(yīng)出其發(fā)病機(jī)制能更好地模擬HIV-1感染；⑤可經(jīng)靜脈、直腸、陰道等途徑感染中國恒河猴；⑥病理學(xué)檢查顯示AIDS死亡猴各個(gè)系統(tǒng)的病變與AIDS患者極為相似，雖然SIVmac239是淋巴細(xì)胞嗜性的病毒，但經(jīng)過體內(nèi)的變異、進(jìn)化后，也可導(dǎo)致與巨噬細(xì)胞嗜性有關(guān)的一些病變，如SIV腦病等。
　　

7、 以上結(jié)果提示，SIVmac239感染的中國恒河猴模型可能是目前研究AIDS發(fā)病機(jī)制及疫苗最適宜的動(dòng)物模型，而本研究將為此模型的推廣應(yīng)用提供重要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，將大大推進(jìn)HIV/AIDS發(fā)病機(jī)制、疫苗等多項(xiàng)研究工作的進(jìn)展。
　　 此外，本研究還提供了很多有意義的線索，如：①直腸感染組CD4+T細(xì)胞數(shù)下降較遲，血漿病毒載量也偏低，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；到晚期有部分動(dòng)物顯示出自發(fā)控制病毒復(fù)制的趨勢；提示對(duì)粘膜感染的免疫機(jī)制進(jìn)行深入研究是非常必

8、要的；②在疾病進(jìn)展的過程中，envVl/V2區(qū)基因在一些特定位點(diǎn)出現(xiàn)較高頻率的變異，其推導(dǎo)氨基酸序列中涉及多處潛在N-糖基化位點(diǎn)的丟失與產(chǎn)生，而文獻(xiàn)報(bào)道糖基化位點(diǎn)的變化可能與中和抗體有關(guān)；③氨基酸序列變異的情況與SIVmac239在印度恒河猴中的變異大致相同，但也有一些位點(diǎn)的變異未見有報(bào)道，如陰道感染組有50％(2/4)的動(dòng)物出現(xiàn)了67V—L的變異，而該變異與CD4+T細(xì)胞數(shù)＞1000個(gè)/μL相關(guān)(P＜0.05)，且50%的比例顯著高于