GDF-9轉(zhuǎn)基因小鼠模型的建立.pdf

1、目的:通過(guò)建立轉(zhuǎn)GDF-9基因的小鼠模型進(jìn)一步揭示GDF-9基因的功能。
　　 方法:構(gòu)建含AseⅠ、AftⅡ和StuⅠ三個(gè)酶酶切位點(diǎn)的pIRES2-GDF9-EGFP的轉(zhuǎn)基因載體，然后通過(guò)原核注射法導(dǎo)入受精卵內(nèi)，獲得轉(zhuǎn)基因胚胎。采用手術(shù)移植法將獲得的轉(zhuǎn)基因胚胎移植到ICR假孕母鼠輸卵管內(nèi)，獲得轉(zhuǎn)基因小鼠。應(yīng)用PCR和Southern blot對(duì)獲得的F0代小鼠進(jìn)行外源基因整合情況鑒定，并將轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性小鼠與陰性小鼠交配繁育后代。

2、
　　 試驗(yàn)結(jié)果:質(zhì)粒注射濃度的比較試驗(yàn)結(jié)果顯示，空白注射組的胚胎存活率與0.5 ngμL、1 ng/μL和2 ng/μL這三個(gè)組的差異不顯著，顯著高于4 ng/μL注射組。DNA注射組中0.5 ng/μL、1 ng/μL和2 ng/μL這三個(gè)濃度組間的分裂率和囊胚率差異不顯著，但均顯著低于空白注射組，4 ng/μL組的分裂率和囊胚率極顯著低于空白注射組。4ng/μL注射組的囊胚陽(yáng)性率為44.4％，顯著高于2 ng/μL組(34

3、.1％)，極顯著高于0.5 ng/μL(18.6％)和1 ng/μL組(17.1％)。選擇對(duì)胚胎毒性低且EGFP表達(dá)率較高的2ng/μL濃度進(jìn)行原核注射，共注射607個(gè)受精卵，存活的受精卵有450個(gè)，存活率為74.1％。將450個(gè)存活的胚胎移植到16只假孕的ICR母鼠的輸卵管內(nèi)，16只母鼠全部懷孕，得到95只仔鼠，產(chǎn)仔率為21.1％。有3只仔鼠在出生2天后死亡。其余92只仔鼠經(jīng)PCR檢測(cè)有4只為轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性小鼠，部分小鼠進(jìn)行Souther