枯草芽孢桿菌BSY-2對大豆疫病菌的拮抗機(jī)理研究.pdf

1、枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)BSY-2是本實(shí)驗(yàn)室分離獲得的一株生防細(xì)菌,前期研究明確該生防細(xì)菌對大豆疫霉有良好抑制作用。本學(xué)位論文在此基礎(chǔ)上,對菌株BSY-2抗菌譜、發(fā)酵液的抗菌穩(wěn)定性、發(fā)酵液中抗菌蛋白提取及抗菌蛋白抑菌機(jī)理進(jìn)行了研究,主要研究結(jié)果如下:
　　1.采用平板對峙法進(jìn)行枯草芽孢桿菌BSY-2的抗菌譜檢測,平板對峙試驗(yàn)顯示,枯草芽孢桿菌BSY-2對10種供試病原真菌均有不同程度的抑制作用,其中枯草芽孢

2、桿菌BSY-2對大豆疫霉AH、串珠鐮孢FM、灰梨孢菌PO的抑制效果極強(qiáng),抑菌活性分別達(dá)到71.51％、91.04%、83.21%,對尖孢鐮孢西瓜?；虵O-2、蘋果炭疽菌GF、丹皮根腐病菌FS、燕麥鐮孢FA、大麗輪枝菌VD、小麥赤霉病菌FG也具有較強(qiáng)的抑制作用,而對尖鐮孢萎蔫?；虵O-1的抑制作用相對較弱,但抑菌活性仍然達(dá)到27.95%。此項(xiàng)研究表明枯草芽孢桿菌BSY-2具有廣譜的抗菌活性,是一株具有良好生防潛能的菌株。
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3、.對枯草芽孢桿菌BSY-2發(fā)酵液的抗菌活性及不同條件下抗菌穩(wěn)定性進(jìn)行初步研究,結(jié)果表明,發(fā)酵液在培養(yǎng)2-5d內(nèi),具有較強(qiáng)的抗菌活性,以培養(yǎng)3d為佳;其抗菌活性在室溫至60℃范圍內(nèi)保持良好;在pH6-10范圍內(nèi),抗菌活性較為穩(wěn)定,對酸穩(wěn)定性較差;其抗菌活性紫外光照射時(shí)間的延長逐漸減弱,發(fā)酵液對紫外光敏感。此項(xiàng)研究為該發(fā)酵液的分離純化工作提供了有力的理論依據(jù),為該菌株的進(jìn)一步研究和產(chǎn)品開發(fā)奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。
　　3.采用硫酸銨沉淀法進(jìn)

4、行枯草芽孢桿菌BSY-2發(fā)酵液中抗菌蛋白的提取,通過不同飽和度硫酸銨沉淀蛋白的拮抗活性檢測明確最佳硫酸銨飽和度,以獲取活性最佳的抗菌蛋白,結(jié)果顯示,當(dāng)(NH3)2SO4飽和度達(dá)到80%時(shí),提取的抗菌蛋白對大豆疫霉菌絲生長抑制效果顯著高于其他處理,抑菌率達(dá)到49.75%,活性仍然保留原發(fā)酵液活性的60%左右,表明枯草芽孢桿菌BSY-2發(fā)酵液中主要有效活性物質(zhì)為蛋白類,且提取發(fā)酵液中有效抗菌蛋白的最佳硫酸銨飽和度80%。
　　4.為了

5、明確抗菌蛋白對大豆疫霉AH的拮抗機(jī)理,測定了抗菌蛋白對大豆疫霉AH菌絲生長、游動(dòng)孢子萌發(fā)和卵孢子產(chǎn)生的抑制作用,結(jié)果顯示,抗菌蛋白能顯著抑制菌絲的正常生長,能夠破壞大豆疫霉菌絲結(jié)構(gòu),導(dǎo)致大豆疫霉菌絲畸形腫脹、扭曲變形、斷裂、原生質(zhì)外滲等;抗菌蛋白處理游動(dòng)孢子12h和24h后萌發(fā)率均顯著下降,萌發(fā)活性喪失近60%;抗菌蛋白導(dǎo)致大豆疫霉卵孢子產(chǎn)量顯著減少,卵孢子形成抑制率為38.46%。此項(xiàng)研究表明,枯草芽孢桿菌BSY-2主要通過抑制大豆疫