亞急性瘤胃酸中毒對山羊血液皮質(zhì)醇濃度和肝臟脂代謝的影響及其機制研究.pdf

1、反芻動物（如牛、羊等）采食高谷物日糧極易誘發(fā)亞急性瘤胃酸中毒(Subacuteruminalacidosis，SARA)，該病是現(xiàn)代奶牛養(yǎng)殖業(yè)中的一種多發(fā)性代謝疾病，嚴重影響奶牛健康和泌乳性能。SARA的臨床癥狀提示反芻動物處于一種應激狀態(tài)，但關(guān)于動物患SARA時應激軸:下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)（Hypothalamus-pituitary-adrenalgland，HPA）活性狀態(tài)的報道卻很少。因此，本文探索了高精料日糧誘導干奶期和泌

2、乳期奶山羊SARA時血液、瘤胃液中皮質(zhì)醇濃度及應激軸相關(guān)基因與蛋白質(zhì)的表達變化;并檢測泌乳期奶山羊在SARA狀態(tài)下時肝臟脂代謝及其關(guān)鍵基因的表達變化，從肝臟代謝角度初步揭示SARA引起乳脂率降低的原因。
　　1.SARA對干奶期山羊HPA軸活性的影響
　　試驗選用干奶期波雜二代山羊12只，隨機分為對照組（精粗比4∶6）和SARA組（精粗比6∶4），試驗期21天。定期采集瘤胃液、血液、肝臟等樣品，pH計迅速測定瘤胃pH值，并用

3、放射免疫分析（Radioimmunoassay,RIA）法檢測血液和瘤胃液中皮質(zhì)醇含量;生化分析法測定血清中總膽固醇(Totalcholesterol，TCH)含量;實時熒光定量PCR法檢測HPA軸中與皮質(zhì)醇合成相關(guān)的基因表達，以及皮質(zhì)醇受體的組織分布等;免疫印記(Westernblot，WB)方法檢測腎上腺3β-類固醇脫氫酶（3β-hydroxysteroiddehydrogenase，3β-HSD）和細胞色素P45017a-羥化酶(

4、17a-hydroxylasecytochromeP450，P45017a)，及各組織糖皮質(zhì)激素受體(Glucocorticoidreceptors，GR)基因表達。
　　結(jié)果:高精料（精粗比6∶4）日糧飼喂山羊3周后成功誘導SARA（SARA組）模型。SARA組山羊采食后瘤胃液pH值小于5.8且持續(xù)時間長達4h，而飼喂低精料比例日糧組山羊（精粗比為4∶6，對照組）瘤胃液pH值均高于6.0。與對照組相比，SARA組山羊外周血皮質(zhì)醇

5、濃度無顯著變化（P＞0.05），但肝靜脈和門靜脈中皮質(zhì)醇濃度均顯著升高（P＜0.05）。SARA組山羊血液膽固醇濃度極顯著低于對照組(P＜0.01)。Real-timePCR結(jié)果顯示，與對照組相比，SARA組山羊下丘腦促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素（Corticotropinreleasinghormone，CRH）和垂體阿片促黑素細胞皮質(zhì)素原（Proopiomelanocortin，POMC）mRNA表達顯著降低(P＜0.05)，垂體促腎上

6、腺皮質(zhì)激素釋放激素受體（Corticotropinreleasinghormonereceptor,CRHR）mRNA有升高趨勢（P=0.07）;腎上腺皮質(zhì)中黑素皮質(zhì)素受體2（Melanocortintype2receptor,MC2R）、類固醇合成急性調(diào)節(jié)蛋白（Steroidogenicacuteregulatoryprotein，StAR）和細胞色素P45011β-羥化酶(11β-hydroxylasecytochromeP450，

7、P45011β)mRNA表達顯著降低（P＜0.05）;腎上腺皮質(zhì)3β-HSD和細胞色素P450膽固醇側(cè)鏈裂解酶(Cholesterolside-chaincleavage，P450scc)mRNA表達分別顯著（P＜0.05）和極顯著（P＜0.01）升高。Westernblot結(jié)果顯示，SARA組腎上腺皮質(zhì)3β-HSD和P450scc蛋白表達分別升高58.6％和39.4％，但未達到統(tǒng)計學顯著水平(P＞0.05)。與對照組比較，SARA組山

8、羊肝臟GRmRNA表達顯著下調(diào)(P＜0.05），下丘腦GR基因表達有下降趨勢（P=0.07），瘤胃上皮組織中GR表達極顯著升高（P＜0.01），但在海馬和垂體中的表達無顯著性差異（P＞0.05）。以上結(jié)果提示，高精料誘導山羊患SARA時HPA軸被激活，使機體處于一定的應激狀態(tài)。外周組織中GR基因表達的變化提示，SARA時HPA軸的激活可能參與機體代謝，尤其是肝臟和瘤胃上皮物質(zhì)代謝的改變。
　　2.SARA對泌乳中期山羊皮質(zhì)醇及乳脂

9、生成的影響
　　此部分試驗旨在觀察短期或長期飼喂高精料日糧對泌乳期奶山羊皮質(zhì)醇濃度以及肝臟脂代謝的影響。
　　1)短期試驗:選擇7只裝有永久性瘤胃瘺管的泌乳中期本地山羊，2×2拉丁方設(shè)計，分別飼喂精粗比為6∶4（SARA組）和4∶6（對照組）的飼料，試驗分兩期，每期14d。采集瘤胃液并測定pH值;RIA法檢測血液和瘤胃液中皮質(zhì)醇含量;Realtime-PCR方法檢測肝臟GRmRNA表達量。
　　結(jié)果:飼喂高精料比例(6