黑羽番鴨生長發(fā)育規(guī)律及GH、LPL基因克隆表達與遺傳效應研究.pdf

1、近年來，我國大部分地區(qū)所飼養(yǎng)的肉用型鴨主要是櫻桃谷鴨、北京鴨，雖然生長速度快，飼料報酬高，但存在脂肪含量高、肉質(zhì)不夠理想等缺點，難以滿足已經(jīng)實現(xiàn)小康的消費者需求。為了滿足人們對小型優(yōu)質(zhì)肉鴨的需求，我們利用國內(nèi)外番鴨資源進行雜交培育，開展了瘦肉率高、肉質(zhì)好、體型適中、羽色純黑的優(yōu)質(zhì)番鴨新品系---黑羽番鴨的培育工作，目前該品系遺傳特性已基本穩(wěn)定。本研究以黑羽番鴨為試驗素材，測定了不同周齡體重，13周齡體尺、屠宰性能、常規(guī)肉品質(zhì)、肌肉營養(yǎng)成

2、分等指標，同時對黑羽番鴨生長激素(GH)和脂蛋白脂酶(LPL)基因進行了克隆、序列分析及多態(tài)性檢測，分析了生長激素基因多態(tài)性與生長、屠宰性能的關聯(lián)性及脂蛋白脂酶基因多態(tài)性與肉質(zhì)性能的關聯(lián)性，檢測了2個基因在肌肉組織中mRNA發(fā)育性表達。主要研究結(jié)果如下:
　　1、對黑羽番鴨生長發(fā)育性能測定結(jié)果表明，初生重在公母之間沒有顯著差異，隨著周齡的上升，公鴨生長速度明顯高于母鴨(P＜0.05)，13周齡時，公鴨體重為3149.6g，母鴨體重

3、為1916.9g，公鴨是母鴨體重的1.64倍，公鴨日增重極顯著大于母鴨(P＜0.01);13周齡體尺測定結(jié)果發(fā)現(xiàn)，公鴨體斜長、胸深、胸寬、龍骨長、脛長、脛圍、半潛水長等7個體尺指標均極顯著大于母鴨(P＜0.01);體重與體尺呈極顯著正相關(P＜0.01)。
　　2、對黑羽番鴨早期體重生長曲線進行了擬合，結(jié)果顯示Logistic、Gompertz、VonBertalanffy3種曲線模型均能較好擬合黑羽番鴨的生長曲線，其中Gompe

4、rtz模型在估計黑羽番鴨早期體重效果更優(yōu)。Gompertz模型估計公鴨拐點體重和時間分別為1309.9g、5.3w，母鴨拐點體重和時間分別為754.7g、4.2w。Gompertz曲線模型結(jié)果可以為黑羽番鴨培育提供參考。
　　3、黑羽番鴨屠宰性能測定結(jié)果表明，除腹脂重外，黑羽番鴨公鴨所有屠宰指標及比率均極顯著高于母鴨(P＜0.01)。肉品質(zhì)測定結(jié)果發(fā)現(xiàn)，公鴨胸肌剪切力和腿肌失水率顯著高于母鴨(P＜0.05);公鴨胸肌鐵、銅含量顯著

5、高于母鴨，腿肌4種礦物元素含量均顯著高于母鴨(P＜0.05);胸肌中鐵、銅、鎂含量顯著高于腿肌，鋅含量顯著低于腿肌(P＜0.05)。母鴨腿肌中肌苷酸含量顯著高于公鴨(P＜0.05)。肌肉中部分氨基酸含量在不同性別的組織中有顯著差異(P＜0.05)。這些結(jié)果顯示不同組織、不同性別會影響肌肉肉品質(zhì)。
　　4、利用同源克隆策略，獲得了黑羽番鴨生長激素基因(GH)761bp的cDNA序列，包括651bp的編碼區(qū)，編碼216個氨基酸。與禽類

6、GH基因核苷酸和氨基酸序列同源性均在90％以上，與人和哺乳動物同源性在55％-77％之間。實時熒光定量PCR檢測結(jié)果顯示，GH基因在第2周齡肌肉中mRNA表達量最高;第4周齡發(fā)生了大幅度下降;在第6周齡時胸肌中表達量有所回升，腿肌仍然處于較低水平;在以后的周齡中維持在一定水平。
　　5、利用同源克隆策略，獲得了黑羽番鴨脂蛋白脂酶基因(LPL)1515bp的cDNA序列，包括1485bp的編碼區(qū)，編碼494個氨基酸。與禽類LPL基因

7、核苷酸和氨基酸序列同源性均在90％以上，與人和哺乳動物同源性在70％-75％之間。實時熒光定量PCR檢測結(jié)果顯示，LPL基因在第2周齡肌肉組織中mRNA表達量較低，在第4周齡出現(xiàn)大幅度上升;在第6周齡公鴨胸、腿肌中表達量繼續(xù)上升，然后下降并維持在較低水平;母鴨腿肌中LPL基因mRNA表達量起伏變化，胸肌維持在較低水平。
　　6、利用PCR-SSCP技術，在GH基因第1內(nèi)含子上發(fā)現(xiàn)了A1251C、A1322G、T1378C、G144

8、0A、G945A，T1039G共6個SNP，群體平均純合度為0.5030，多態(tài)信息含量為0.3735。前4個點突變形成了AA、AB、BB3種基因型，在番鴨早期生長發(fā)育過程中，BB型公鴨體重在不同周齡時處于最高值;在13周齡屠宰時，公鴨BB型的宰前活重、屠體重、半凈膛重、全凈膛重顯著高于AA型和AB型(P＜0.05);在內(nèi)臟組織中，BB型腹脂重、心重顯著高于AB型(P＜0.05); AA型、AB型、BB型3種基因型間屠宰指標百分比無顯著差

9、異(P＞0.05);母鴨所有指標在3種基因型間均無顯著差異(P＞0.05)。后2個點突變形成了CC、CD、DD3種基因型，在番鴨早期生長發(fā)育過程中，CC型公鴨體重在不同周齡時處于最高值;在13周齡屠宰時。公鴨CC型的宰前活重、屠體重、半凈膛重、全凈膛重、腹脂重、腺肌胃重顯著高于CD型和DD型(P＜0.05); CC型心重顯著高于CD型(P＜0.05);CC型、CD型、DD型3種基因型間屠宰指標百分比無顯著差異(P＞0.05)。母鴨所有指

10、標在3種基因型間均無顯著差異(P＞0.05)。這些關聯(lián)分析表明B、C基因可能是公鴨早期增重的有利基因，在母鴨上還需進一步驗證。
　　7、利用PCR-SSCP技術，在LPL基因第3內(nèi)含子上發(fā)現(xiàn)了A4G，G120A、A128G共3個SNP，群體平均純合度為0.5028，多態(tài)信息含量為0.3736。前1個點突變形成了EE、EF、FF3種基因型，EF型母鴨腿肌失水率顯著高于FF型（P＜0.05，下同）。EF型公鴨腿肌中鎂含量顯著高于FF型

11、。EE型公鴨胸肌中Ala含量顯著性高于EF型、FF型;FF型母鴨胸肌中Asp、His含量顯著性高于EF型;FF型公鴨腿肌中Ser、Pro含量顯著高于EE型;EE型母鴨腿肌Lys含量顯著高于EF型，EF型Cys、Met含量顯著性高于FF型(P＜0.05)。后2個點突變形成了HH、HI、Ⅱ3種基因型，Ⅱ型公鴨胸肌中Pro含量顯著高于HI型，Ⅱ型Val、Met、Phe含量顯著高于HH型;HI型母鴨胸肌中His含量顯著性高于Ⅱ型;Ⅱ型公鴨腿肌中

12、Asp含量顯著高于HI型，HH型His含量顯著高于Ⅱ型，Ⅱ型Pro含量顯著高于HH型，Ⅱ型Ile、Phe含量顯著高于HH型、HI型;HI型母鴨腿肌中Gly含量顯著高于Ⅱ型，HI型Arg含量顯著高于HH型(P＜0.05)。這些結(jié)果推斷LPL可作為公鴨胸肌中Ala、Pro、Val、Met、Phe含量，公鴨腿肌中鎂、Ser、Pro、Asp、His、Ile、Phe含量，母鴨胸肌中Asp、His含量，母鴨腿肌中失水率、Lys、Cys、Met、Gl