TNF-α和IFN-γ及含有五種細(xì)胞因子的奶牛乳汁對(duì)奶牛乳腺纖維化影響的研究.pdf

1、奶牛乳腺纖維化主要由奶牛乳腺炎引起，各種病因引起的奶牛乳腺炎均可導(dǎo)致奶牛乳腺不同程度的纖維化過程。纖維化的乳腺泌乳量降低，嚴(yán)重時(shí)發(fā)展為乳腺硬化導(dǎo)致奶牛淘汰。研究細(xì)胞因子在奶牛乳腺纖維化中的作用，對(duì)奶牛乳腺纖維化的防治具有重要意義。
　　目前關(guān)于奶牛乳腺纖維化發(fā)生機(jī)制的研究報(bào)道很少，在奶牛乳腺纖維化過程中，除間質(zhì)成纖維細(xì)胞（BMFB）能夠產(chǎn)生細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）外，奶牛乳腺上皮細(xì)胞（BMEC）能否通過上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）形成肌纖

2、維母細(xì)胞（MFB）并合成 ECM仍不明確，與纖維化相關(guān)的一些細(xì)胞因子與 BMEC的轉(zhuǎn)分化及BMFB產(chǎn)生ECM的相互關(guān)系需要深入研究。本研究分別用不同濃度的TNF-α（1、5、10ng/mL）、IFN-γ(5、10、20ng/ml)及TNF-α/IFN-γ聯(lián)合液（濃度比分別為1:1、1:2、1:5）作用于體外培養(yǎng)的BMEC和BMFB，于不同時(shí)刻（12h、24h、48h、72h）取細(xì)胞總RNA和總蛋白，分別用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR和wes

3、tern-blot方法檢測平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA），結(jié)締組織生長因子（CTGF）及膠原I（COLIα1） mRNA及α-SMA蛋白表達(dá)水平。同時(shí)，根據(jù)細(xì)胞因子放免檢測結(jié)果，用篩選出的含有五種細(xì)胞因子（TNF-α、IFN-γ、TGF-β1、bFGF、PDGF）的奶牛乳汁分別作用體外培養(yǎng)BMEC和BMFB，于不同的時(shí)刻(12h、24h、48h、72h)，用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR的方法檢測含有五種細(xì)胞因子的奶牛乳汁對(duì)兩種細(xì)胞α-SMA、

4、CTGF和COLIα1 mRNA相對(duì)表達(dá)量的影響。
　　結(jié)果顯示：外源性TNF-α對(duì)BMEC和BMFBα-SMA、CTGF和COLIα1三種基因mRNA表達(dá)基本起促進(jìn)作用，對(duì)BMFBα-SMA的蛋白表達(dá)也起促進(jìn)作用，但未檢測到BMECα-SMA蛋白的表達(dá)；外源性IFN-γ對(duì)BMEC和BMFBα-SMA、CTGF和COLIα1三種基因mRNA及α-SMA蛋白表達(dá)均呈抑制作用。不同比例的TNF-α/IFN-γ聯(lián)合液均能明顯抑制BMEC

5、 CTGF、α-SMA、COLIα1 mRNA及α-SMA蛋白表達(dá)，且負(fù)時(shí)效、負(fù)量效關(guān)系明顯；對(duì)BMFB CTGF、α-SMA mRNA及α-SMA蛋白表達(dá)也起明顯抑制作用，但對(duì)COLIα1 mRNA表達(dá)起促進(jìn)作用。TNF-α和TGF-β高含量的乳汁作用BMEC和BMFB在各時(shí)刻（12h、24h、48h、72h）α-SMA、CTGF和COLIα1 mRNA表達(dá)量均比低含量的乳汁作用高；IFN-γ高含量的乳汁對(duì)BMEC CTGF和COLI

6、α1 mRNA表達(dá)量的抑制作用較低含量的乳汁強(qiáng)，而對(duì)α-SMA mRNA表達(dá)量作用相反；對(duì)BMFB CTGF和COLIα1 mRNA表達(dá)量的抑制作用，12h、24h含量高的乳汁較含量低的乳汁作用強(qiáng)，但48h、72h卻相反，而對(duì)BMFBα-SMA的mRNA表達(dá)量的抑制作用，IFN-γ高含量的乳汁比低含量的乳汁強(qiáng)。bFGF高含量的乳汁作用BMEC和BMFB，CTGF和COLIα1mRNA表達(dá)量均比bFGF低含量的乳汁作用高，但對(duì)α-SMA

7、mRNA表達(dá)的抑制作用卻相反。PDGF-BB高含量的乳汁作用BMEC，CTGF和COLIα1 mRNA表達(dá)量均比低含量的乳汁作用高，但對(duì)α-SMA mRNA表達(dá)的抑制作用卻相反；PDGF-BB高含量的乳汁作用BMFB，α-SMA mRNA表達(dá)量均比低含量的乳汁作用高，而對(duì)CTGF和COLIα1 mRNA表達(dá)的影響卻相反。
　　研究結(jié)果表明，兩種外源性細(xì)胞因子及含有細(xì)胞因子的乳汁對(duì)奶牛乳腺上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞中纖維化指標(biāo)的表達(dá)均產(chǎn)生