豬骨骼肌型α肌動蛋白及蘋果酸酶1基因啟動子的功能分析.pdf

1、豬是與人類關(guān)系最為密切的家畜之一，與人們的日常生活息息相關(guān)。豬肉是世界上消耗量最大的肉類，豬肉產(chǎn)量及品質(zhì)的提高與人們生活水平的改善密切相關(guān)。
　　 利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)使啟動子啟動外源基因在骨骼肌中特異性的表達是提高肉質(zhì)的一個重要方法。豬骨骼肌α肌動蛋白(α-actin)是構(gòu)成骨骼肌肌纖維細絲的主要成分，其啟動子能使外源基因在骨骼肌中特異性表達。本研究分別用PCR、限制性內(nèi)切酶酶切和定點突變方法構(gòu)建不同表達載體，通過細胞培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染技術(shù)

2、，利用雙熒光素酶報告系統(tǒng)檢測不同載體的表達情況。結(jié)果表明：
　　 1.2.0Kb-2.3Kb和0.06Kb-0.37Kb是調(diào)控豬骨骼肌型α肌動蛋白基因表達水平的重要區(qū)段。
　　 2.在0.06Kb-0.37Kb有一個CArGbox位點影響該基因的轉(zhuǎn)錄，刪除和突變該片段后，其啟動活性分別是3.04Kb片段的20％和43%，顯著降低(P<0.01)。
　　 研究結(jié)果可為構(gòu)建豬骨骼肌特異性高效表達的載體，以指導(dǎo)外源基因

3、在豬肉中特異性的表達提供參考。
　　 脂肪的沉積能力與豬肉品質(zhì)有著密切的聯(lián)系。蘋果酸酶1(malicenzyme1，簡稱ME1)是機體內(nèi)源性脂肪酸合成的關(guān)鍵酶，與生物體的脂肪酸合成效率密切相關(guān)。豬的脂肪沉積能力與ME1的表達水平有關(guān)。為了研究該基因在轉(zhuǎn)錄水平上的表達調(diào)控，本研究分別用PCR和定點突變等方法，克隆了豬ME1基因的5’調(diào)控區(qū)，研究了其多態(tài)性與報告基因表達量的關(guān)系，通過構(gòu)建不同刪除載體分析了該基因5’調(diào)控區(qū)的功能。結(jié)果

4、表明：
　　 1.在豬ME1基因5’調(diào)控區(qū)-1068位點的G到A的突變產(chǎn)生的等位基因G有增加報告基因表達的趨勢，但差異不顯著。
　　 2.刪除試驗結(jié)果顯示，該基因的5’調(diào)控區(qū)614bp-717bp有增強豬MEI基因表達的順式元件，263bp-405bp區(qū)段有抑制豬MEI基因表達的順式元件。
　　 綜上所述，本研究對豬骨骼肌發(fā)育及脂肪沉積有密切關(guān)系的兩個基因α-actin和ME1的轉(zhuǎn)錄調(diào)控進行了分析，分別找到了調(diào)控