食物中氨基酸的測(cè)定方法

1、<p>　　食物中氨基酸的測(cè)定方法（1）</p><p>　　一、氨基酸自動(dòng)分析儀法 1. 原理 食物蛋白質(zhì)經(jīng)鹽酸水解成為游離氨基酸，經(jīng)氨基酸分析儀的離子交換柱分離后，與茚三酮溶液產(chǎn)生顏色反應(yīng)，再通過分光光度計(jì)比色測(cè)定氨基酸含量。一份水解液可同時(shí)測(cè)定天冬，蘇，絲，谷，脯，甘，丙，纈，蛋，異亮，亮，酪，苯丙，組，賴和精氨酸等16種氨基酸，其最低檢出限為10pmol。 2. 適用范圍

2、 GB/T14965-1994食物中氨基酸的測(cè)定方法。 本法適用于食物中的16種氨基酸的測(cè)定。其最低檢出限為10pmol。本方法不適用于蛋白質(zhì)含量低的水果、蔬菜、飲料和淀粉類食物的測(cè)定 3. 儀器和設(shè)備 3.1 真空泵 3.2 恒溫干燥箱 3.3 水解管：耐壓螺蓋玻璃管或硬質(zhì)玻璃管，體積20～30ml。用去離子水沖洗干凈并烘干。 3.4 真空干燥器（溫度可調(diào)節(jié)） 3.5 氨基酸自動(dòng)分析儀。 4. 試劑 全部試劑

3、除注明外均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水為去離子水。 4.1 濃鹽酸：優(yōu)級(jí)純 4.2 6mol/L鹽酸：濃鹽酸與水1：1混合而成。 4.3 苯酚：需重蒸餾。 4.4 混合氨基酸標(biāo)準(zhǔn)液（儀器制造公司出售）：0.00</p><p><b>　　氨基酸標(biāo)準(zhǔn)峰面積 </b></p><p>　　所以，100g樣品中氨基酸的mg 數(shù)=

4、 上機(jī)樣品液中氨基酸量（nmol）×f ×Mr×100 </p><p>　　m×V×106 式中 f--樣品的稀釋倍數(shù) Mr--氨基酸的相對(duì)分子量 m--樣品質(zhì)量（g） V--上機(jī)時(shí)的進(jìn)樣量（此處為50μL） 7.其他 7.1 測(cè)定條件（以Beckman-6300型氨基酸自動(dòng)分析儀為例）

5、緩沖液流量：20mL/h； 茚三酮流量：10mL/h； 柱溫：50、60和70℃； 色譜柱：20cm； 分析時(shí)間：42min。 7.2 標(biāo)準(zhǔn)出峰順序和保留時(shí)間 序號(hào) 出峰順序 保留時(shí)間/min 序號(hào) 出峰順序 保留時(shí)間/min 1 天冬氨酸 5.55 9 蛋氨酸 19.63 2 蘇氨酸 6.60 10 異亮氨酸 21.24

6、3 絲氨酸 7.09 11 亮氨酸 22.06 4 谷氨酸 8.72 12 酪氨酸 24.52 5 脯氨酸 9.63 13 苯丙氨酸 25.76 6 甘氨酸 12.24 14 組氨</p><p>　　7.3允許差： 同實(shí)驗(yàn)室平行測(cè)定或連續(xù)兩次測(cè)定結(jié)果相對(duì)偏差絕對(duì)值≤12

7、%。 </p><p>　　食物中氨基酸的測(cè)定方法（2）</p><p>　　二、食物中胱氨酸的測(cè)定方法---氨基酸自動(dòng)分析儀法（過甲酸氧化） 1. 原理 在用鹽酸水解蛋白質(zhì)的過程中，胱氨酸易被破壞，現(xiàn)多采用過甲酸氧化法將蛋白質(zhì)中的胱氨酸及半胱氨酸氧化成半胱磺酸，其反應(yīng)如下： SH NH2 O SO3H NH2

8、 O </p><p>　　CH2 CH COOH + 3H C OOH CH2 CH COOH + 3H C OH </p><p>　　半胱氨酸 過甲酸 半胱磺酸 甲酸 </p><p>　　生成的半胱磺酸可在氨基酸自動(dòng)分析儀上進(jìn)行測(cè)定，與標(biāo)準(zhǔn)半胱磺酸比較，計(jì)算其含量。 2. 適用范圍

9、 參照中國預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院營養(yǎng)與食品衛(wèi)生研究所編寫的食物營養(yǎng)成分測(cè)定法第三版。適用于食物中胱氨酸的測(cè)定。 3. 儀器 水解瓶：耐壓螺蓋玻璃管或硬質(zhì)試管，體積20～30mL，用去離子水沖凈并烘干，電熱減壓蒸發(fā)器。 4. 試劑 過甲酸：取9mL分析純甲酸加入1mL30%過氧化氫混合，在室溫放置2小時(shí)以上。 5. 操作步驟 5.1 過甲酸氧化：稱取一定量的食物樣品置于水解瓶中，使樣品含蛋白質(zhì)在5～10mg，加入1

10、mL過甲酸試劑，在室溫放置3小時(shí)。加1mL乙醇終止氧化。將樣品瓶置于電熱減壓器中，于45℃減壓蒸干，用1mL去離子水淋洗瓶壁，再蒸干，反復(fù)3次，以除去過甲酸。 5.2 鹽酸水解：同食物中氨基酸（16種）測(cè)定方法 5.3 在Bekman6300氨基酸自動(dòng)分析儀上，在注文50℃時(shí)用pH3.25檸檬酸緩沖液洗脫，半胱磺酸的出峰時(shí)間約在1.78分鐘。 6. 計(jì)算 </p><p>　　上機(jī)標(biāo)準(zhǔn)液中半胱磺酸量（

11、nmol）×樣品峰面積</p><p>　　上機(jī)樣品液（50μl）中半胱磺酸量=</p><p>　　半胱磺酸標(biāo)準(zhǔn)峰面積 上機(jī)樣品中半胱磺酸量（nmol）×D×M×100 </p><p>　　100

12、g樣品中胱氨酸mg數(shù)=</p><p>　　W×E×106×2 式中 D：樣品稀釋倍數(shù) M：胱氨酸分子量（ng） W：稱樣量（g） E：上機(jī)時(shí)的進(jìn)樣量（此處為50μl） </p><p>　　食物中氨基酸的測(cè)定方法（3）</p><p>　　三、食物中色氨酸的測(cè)定--熒光分光光度法 1. 原理 食物中蛋白質(zhì)在酸

13、水解過程中，其色氨酸極易被分解，本法用堿水解蛋白質(zhì)，直接測(cè)定色氨酸的天然熒光。在蛋白質(zhì)水解液中，只有色氨酸和酪氨酸可以檢測(cè)到熒光。在pH為11時(shí)，色氨酸的熒光強(qiáng)度比酪氨酸大100倍，且兩種氨基酸的熒光峰相差40多nm，利用此特點(diǎn)，可在有大量酪氨酸的存在下，檢測(cè)色氨酸的含量。 2 適用范圍 參照中國預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院營養(yǎng)與食品衛(wèi)生研究所編寫的食物營養(yǎng)成分測(cè)定法第三版。適用于食物中色氨酸的測(cè)定。 3.儀器 3.1熒光分光光度計(jì)

14、 3.2減壓蒸發(fā)器 3.3螺旋蓋大口瓶（瓶蓋要有橡皮墊） 3.4聚四氟乙烯管 3.5小玻璃球 3.6烘箱 4.試劑 （1）5mol/L NaOH：內(nèi)含0.5%可溶性淀粉，臨用前配制。 （2）4mol/L 尿素（pH=11） （3） 6mol/L鹽酸 （4） 溴百里酚藍(lán)指示劑：稱取0.1g溴百里酚藍(lán)加0.1mol/L氫氧化鈉1.6ml，配成0.05%水溶液。 （5） 高純氮（含量99.999%） （6） 辛醇甲苯溶