錳缺乏對(duì)肉仔雞脛骨生長(zhǎng)板軟骨細(xì)胞發(fā)育相關(guān)因子的影響.pdf

1、為研究錳缺乏對(duì)肉仔雞脛骨生長(zhǎng)板發(fā)育的影響，探討錳缺乏導(dǎo)致脛骨發(fā)育障礙的信號(hào)機(jī)制，本研究主要從軟骨細(xì)胞增殖、軟骨細(xì)胞凋亡和軟骨細(xì)胞外基質(zhì)降解三個(gè)方面著手，探討了錳缺乏對(duì)脛骨生長(zhǎng)板發(fā)育相關(guān)因子的影響，為系統(tǒng)研究錳缺乏導(dǎo)致肉雞脛骨“短粗癥”的發(fā)生機(jī)理提供一定的科學(xué)依據(jù)。
　　 90只1日齡Arbor Acres雛雞隨機(jī)分為三組，并分別給予以下日糧：對(duì)照日糧(60mgMn/kg)，錳缺乏日糧(40mgMn/kg，錳缺乏Ⅰ組；8.7mgM

2、n/kg，錳缺乏Ⅱ組)。每天給予24h光照，保證充足的日糧和飲水。飼喂42天后，取脛骨生長(zhǎng)板。用游標(biāo)卡尺測(cè)量生長(zhǎng)板厚度，用測(cè)微尺測(cè)量生長(zhǎng)板增殖區(qū)和肥大區(qū)寬度。然后將其固定于4％福爾馬林中，石蠟包埋，5um切片。石蠟切片用于HE染色和免疫組化。取大約0.2g脛骨生長(zhǎng)板迅速放入液氮中保存，用于RNA的提取。另外一些生長(zhǎng)板樣品在2.5％戊二醛固定24h，環(huán)氧樹脂包埋，通過電鏡對(duì)生長(zhǎng)板軟骨細(xì)胞進(jìn)行超微檢查。用TUNEL法檢測(cè)生長(zhǎng)板軟骨細(xì)胞的凋亡

3、情況；用免疫組化法檢測(cè)P21、Bcl-2、cbfα1、CDMP-1、MMP-1、Cx43、PTHrP蛋白的表達(dá)；用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR方法檢測(cè)P21、Bcl-2基因的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：
　　 (1)錳缺乏導(dǎo)致肉仔雞脛骨生長(zhǎng)板以及生長(zhǎng)板的增殖區(qū)和肥大區(qū)厚度顯著變窄(P<0.05)。
　　 (2)與對(duì)照組相比，低錳組P21的表達(dá)顯著增多(P<0.05)；CDMP-1的表達(dá)量減少，但三組間沒有顯著差異(P>0.05)；C

4、x43的表達(dá)量顯著增多(P<0.05)；PTHrP的表達(dá)量顯著減少(P<0.05)；cbfα1的表達(dá)量減少；MMP-1顯著增多(P<0.05)。
　　 (3)錳缺乏導(dǎo)致肉仔雞脛骨生長(zhǎng)板軟骨細(xì)胞線粒體外膜模糊不清，線粒體嵴發(fā)生斷裂；TUNEL法表明，錳缺乏組肉仔雞脛骨生長(zhǎng)板軟骨細(xì)胞凋亡率顯著增高(P<0.05)；與對(duì)照組相比，低錳組Bcl-2的相對(duì)表達(dá)顯著減少(P<0.05)，兩低錳組間Bcl-2的相對(duì)表達(dá)量無顯著差異(P>0.0