生長因子及MAPK途徑對生長板軟骨細胞增殖和分化的影響.pdf_第1頁
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1、暨南大學(xué)博士學(xué)位論文麓800865生長因子及MAPK途徑對生長板軟骨細胞增殖和分化的影響EffectsofgrowthfactorsandMAPKpathwayonthegrowthplatechondrocyteproliferationanddifferentiation作者姓名:指導(dǎo)教師姓名及學(xué)位、職稱:季煜華曾耀英研究員學(xué)科、專業(yè)名稱:生物醫(yī)學(xué)工程論文提交日期:2005年4月論文答辯日期:2005年5月30日答辯委員會主席:宋烈

2、昌教授論文評閱人:學(xué)位授予單位和日期:符林春教授周聯(lián)教授楊培增教授暨南大學(xué)2005年6月日未妻塑造:導(dǎo)師簡意紉全文公掰一中英文摘要生長因子和MAPK途徑對生長板軟骨細胞增殖和分化的影響博士研究生:季煜華導(dǎo)師:曾耀英研究員摘要第一章大鼠肋生長板軟骨細胞的分離、培養(yǎng)及生物學(xué)特性的研究目的:建立大鼠肋生長板軟骨細胞的體外培養(yǎng)模型,探討其在體外培養(yǎng)條件下的生物學(xué)特性。方法:顯微解剖分離出大鼠肋生長板,酶消化法(O05%透明質(zhì)酸酶和O2%II型膠

3、原酶)獲得分散的大鼠肋生長板軟骨細胞(ratcostochondralgrowthplatechondrocyte,RGC),常規(guī)接種,單層培養(yǎng)。對原代~第5代RGC進行生長動力學(xué)分析,并通過免疫細胞化學(xué)、阿爾新蘭染色和Westernblot檢測原代~第5代RGC中II型膠原、d—SMA和蛋白多糖的分布和表達。結(jié)果:原代培養(yǎng)的生長板軟骨細胞中95%以上的細胞Ⅱ型膠原陽性染色,細胞核周圍和細胞膜周邊都有II型膠原的陽性染色,陽性染色的纖維

4、包裹著細胞核,保持圓形的細胞強陽性染色。隨著傳代次數(shù)的增加,表達II型膠原的細胞比例和表達量下降,第6代RGC中僅保持圓形的細胞仍呈陽性染色。原代培養(yǎng)的RGC表達大量的蛋白多糖,阿爾新蘭陽性染色。第2,3代阿爾新蘭染色減少,3代后阿爾新蘭染色皆呈陰性。原代RGC中,nSMA的表達很弱,隨傳代次數(shù)增加,q—SMA的表達量逐漸增高;Ⅱ型膠原的表達剛好和nSMA相反,原代RGC表達最強,隨著傳代次數(shù)的增加,表達逐漸下降。結(jié)論:成功建立大鼠肋生

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