抗Bt Cry1Ac粉紋夜蛾離體細(xì)胞與敏感細(xì)胞的差異蛋白定量分析.pdf

1、上世紀(jì)五十年代以來，蘇云金芽孢桿菌(Bacillus thuringiensis,Bt)殺蟲劑因毒力高、殺蟲快、不殺天敵和有益微生物、不破壞生態(tài)平衡、具有適應(yīng)大規(guī)模發(fā)酵生產(chǎn)、低成本等優(yōu)點(diǎn)，蘇云金芽孢桿菌已成為世界上應(yīng)用最廣泛的微生物殺蟲劑。然而，隨著蘇云金芽孢桿菌殺蟲劑長期大量使用，發(fā)現(xiàn)全世界范圍內(nèi)多種昆蟲都對(duì)其產(chǎn)生了抗性，這些抗性均呈現(xiàn)遞增的趨勢(shì)。因此闡明抗性形成和發(fā)展規(guī)律揭示抗性的分子機(jī)制是治理好昆蟲對(duì)Bt抗性的關(guān)鍵問題。

2、本實(shí)驗(yàn)室長期致力于這方面的研究，尤其是針對(duì)粉紋夜蛾BTI-Tn-5B1-4細(xì)胞對(duì)CrylAc毒素產(chǎn)生高水平抗性的機(jī)理做了大量的研究工作，并從蛋白質(zhì)組水平探討抗性產(chǎn)生的分子機(jī)制，采用雙向電泳技術(shù)分離了敏感和抗性兩種細(xì)胞的總蛋白和總膜蛋白，銀染顯色，Melanie ViewerⅡ軟件分析，獲得了一些差異蛋白質(zhì)，對(duì)部分差異蛋白質(zhì)點(diǎn)測(cè)定了肽質(zhì)量指紋圖譜(peptide mass fingerprint，簡稱PMF)并查詢了蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫。經(jīng)數(shù)據(jù)庫

3、查詢，初步鑒定差異蛋白質(zhì)為一些與胞質(zhì)外周蛋白，脂多糖生物合成蛋白和免疫球蛋白重鏈等具同源性的蛋白質(zhì)。 在前人工作如毒力測(cè)定、抗性篩選和穩(wěn)定以及在轉(zhuǎn)錄組和蛋白質(zhì)組水平研究了敏感與抗性兩種細(xì)胞的基因差異表達(dá)，并初步鑒定了一些差異表達(dá)基因或差異蛋白質(zhì)的基礎(chǔ)上，本實(shí)驗(yàn)采用雙向電泳技術(shù)分離了敏感和抗性兩種細(xì)胞的總蛋白，銀染顯色，ImageMaster 2D Platinum 6.0軟件分析，統(tǒng)計(jì)了凝膠上所有的差異蛋白點(diǎn)，并初步分析量的差異

4、。分別以粉紋夜蛾細(xì)胞BTI-Tn-581-4細(xì)胞總蛋白雙向電泳圖譜和粉紋夜蛾抗CrylAC的BTI-Tn-581-4細(xì)胞總蛋白雙向電泳圖譜為參照，在抗性細(xì)胞的2-DE總蛋白圖譜上檢測(cè)到的差異點(diǎn)有209個(gè)，其中表達(dá)量上調(diào)2-3倍的有17個(gè)，表達(dá)量上調(diào)3倍以上的有18個(gè)，這里面表達(dá)量上調(diào)5倍以上的有4個(gè)；表達(dá)量下調(diào)2-3倍的有13個(gè)，下調(diào)3倍以上的有7個(gè)，其余各點(diǎn)均為Hi5圖上有而L123圖上消失的點(diǎn)；在敏感細(xì)胞的總蛋白2-DE圖譜上檢測(cè)到