棉鈴蟲對(duì)Bt毒素——Cry1Ac抗性的生化及分子機(jī)理研究.pdf

1、南京農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文棉鈴蟲對(duì)Bt毒素——Cry1Ac抗性的生化及分子機(jī)理研究姓名：許新軍申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：農(nóng)業(yè)昆蟲與害蟲防治指導(dǎo)教師：吳益東20050601中：充隆了Cadherin類受體全長(zhǎng)基因。敏感品系Cadherin類受體基因推測(cè)的氨基酸序列全長(zhǎng)1730，與GenBank中已公布的美洲棉鈴蟲、煙芽夜蛾、印度谷螟、家蠶、煙草天蛾、歐洲玉米螟、紅鈴蟲及二化螟的相似性分別達(dá)到959％、83％、619％、615％、594％、58

2、3％、54％和537％。而抗性品系中Cadherin類受體基因在第1258位變異產(chǎn)生了一個(gè)提前的終止密碼子TAA，從而導(dǎo)致表達(dá)的受體蛋白大部分缺失，僅含有428個(gè)氨基酸殘基。采用抗性遺傳分析證明GYBT品系中Cadherin類受體基因的缺失與棉鈴蟲對(duì)CrylAc毒素抗性緊密連鎖。根據(jù)抗性和敏感品系中Cadherin類受體基因組DNA的差異，篩選出一對(duì)用于DNA水平上區(qū)分抗性、敏感個(gè)體的特異引物，對(duì)抗住和敏感品系F2后代進(jìn)行基因型檢測(cè)，進(jìn)

3、一步驗(yàn)證了Cadherin受體缺失與抗性緊密相關(guān)。四、棉鈴蟲中腸受體與CrylAc毒素結(jié)合分析以同位素125I標(biāo)記的毒素進(jìn)行配基一受體結(jié)合試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，與敏感品系相比，抗性品系BBMV與CrylAc毒素的親合力略有下降，而受體位點(diǎn)濃度(Bmax)差異不顯著，引入Hill因子進(jìn)行結(jié)合曲線擬合計(jì)算的結(jié)果表明毒素與棉鈴蟲BBMV的結(jié)合之間可能存在互作關(guān)系。用生物索標(biāo)記的CrylAc毒素分別與敏感品系(GY)和抗性品系(GYBT)棉鈴蟲六齡幼蟲中

4、腸BBMV進(jìn)行雜交試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)除了85Kd的內(nèi)源性生物素結(jié)合蛋白外，在敏感品系的中腸BBMV中分別有210Kd、190Kd、160Kd及120Kd四個(gè)主要的結(jié)合條帶，而在抗性品系中210Kd及190Kd的條帶發(fā)生了缺失，據(jù)此推測(cè)210Kd的結(jié)合條帶即為抗性品系發(fā)生基因缺失的Cadherin類受體蛋白，而190Kd的結(jié)合蛋白可能是部分降解的或表達(dá)后修飾過(guò)的Cadherin類受體蛋白，160Kd和120Kd為APN類受體結(jié)合蛋白。在加入10倍