林蔭銀蓮花組織培養(yǎng)過程中褐變控制技術(shù)及相關(guān)機(jī)理研究.pdf

1、林蔭銀蓮花(Anemone flaccida Fr.Schmidt)屬銀蓮花屬(Anemone)植物，以其干燥根莖入藥，俗稱地烏，具有祛風(fēng)濕、助筋骨、消腫止痛等功效，開發(fā)意義巨大。在已建立的林蔭銀蓮花芽外植體離體快繁體系中，褐變現(xiàn)象普遍存在，成為影響外植體分化增殖和組培成功的限制因素之一。因此，研究林蔭銀蓮花外植體褐變控制技術(shù)及褐變機(jī)理具有重要意義。本研究以林蔭銀蓮花組培苗為材料，研究了空白培養(yǎng)基、低溫黑暗預(yù)培養(yǎng)、抗氧化劑浸泡預(yù)處理以及

2、不同吸附劑(活性炭)和抗氧化劑(硫代硫酸鈉、檸檬酸和抗壞血酸)對(duì)林蔭銀蓮花外植體生長(zhǎng)分化增殖和褐變的影響，探討了外植體褐變與總酚含量、POD活性、PPO活性之間的相關(guān)性。主要研究結(jié)果如下：
　　 1.添加1 g/L活性炭(AC)的空白蔗糖培養(yǎng)基預(yù)培養(yǎng)2d，然后轉(zhuǎn)接到正常培養(yǎng)基培養(yǎng)，林蔭銀蓮花外植體褐變控制效果最好，同時(shí)增殖系數(shù)有所提高。
　　 2.繼代轉(zhuǎn)接前將林蔭銀蓮花組培苗低溫預(yù)處理7d，可以降低褐變程度，但是增殖系數(shù)

3、有所減少。
　　 3.繼代轉(zhuǎn)接之后，暗處理芽外植體4d，然后轉(zhuǎn)入正常光照下培養(yǎng)，可以減輕褐變程度。低溫預(yù)處理4d可以有效地控制褐變，但轉(zhuǎn)入正常培養(yǎng)條件下，褐變急劇加重。另外，低溫、暗處理都會(huì)降低增殖系數(shù)。
　　 4.以0.5 g/L硫代硫酸鈉浸泡林蔭銀蓮花芽外植體，然后接種培養(yǎng)，褐變控制及生長(zhǎng)增殖效果最佳，其次是0.25 g/L抗壞血酸浸泡預(yù)處理。
　　 5.不同褐變抑制劑對(duì)林蔭銀蓮花外植體褐變控制效果依次為：硫

4、代硫酸鈉>抗壞血酸>檸檬酸>活性炭。其中抗氧化劑以添加0.2 g/L硫代硫酸鈉褐變控制及生長(zhǎng)增殖效果最佳，其次是添加0.5 g/L的抗壞血酸，吸附劑以添加0.1 g/LAC褐變控制及生長(zhǎng)增殖效果較好。
　　 6.基本培養(yǎng)基中蔗糖用量減半、微量元素用量減半或者肌醇用量加倍，可以提高組培苗增殖系數(shù)，減輕褐變的嚴(yán)重程度。
　　 7.添加硫代硫酸鈉可以不同程度地降低外植體總酚含量和POD活性，添加低濃度的硫代硫酸鈉也可以降低PP