棉花成花素同源基因GhFTL1啟動(dòng)子的克隆與功能初步分析.pdf

1、棉花是我國(guó)的重要的經(jīng)濟(jì)作物之一，新疆是我國(guó)棉花的主產(chǎn)區(qū)，因?yàn)闊o(wú)霜期短的原因，低溫會(huì)對(duì)未成熟的棉花的品質(zhì)以及纖維都有一定的影響，所以中早熟棉花新品種的創(chuàng)新與研究是很有必要的，植物早花可以解決以上的問(wèn)題。植物早花不但受自身體內(nèi)相關(guān)基因表達(dá)的調(diào)控，還受環(huán)境等因素的影響。成花素是所有開(kāi)花植物所必需的，成花素的本質(zhì)是FT蛋白，F(xiàn)T蛋白(誘導(dǎo)開(kāi)花的成花素信號(hào)分子)從葉片經(jīng)過(guò)韌皮部長(zhǎng)距離運(yùn)輸?shù)竭_(dá)莖頂端分生組織后，與頂端組織特異表達(dá)的基因編碼產(chǎn)物之間結(jié)

2、合形成一種蛋白復(fù)合體，共同促進(jìn)下游成花基因的表達(dá)，從而促進(jìn)植物開(kāi)花。目前已從許多植物中分離了FT的同源基因。染色體歩移技術(shù)因快速、簡(jiǎn)單、高效等優(yōu)點(diǎn)而備受青睞，使用這種技術(shù)可以有效獲取與已知序列相鄰的未知序列，也是克隆啟動(dòng)子的一種有效方法。
　　在轉(zhuǎn)基因棉工程中，啟動(dòng)子在棉花中的研究很多，但是大多的應(yīng)用都是數(shù)采用了組成型啟動(dòng)子。而且所用的植物表達(dá)載體大多數(shù)都是利用外源型啟動(dòng)子例如，CaMV35S。隨著Tail-PCR、SiteFin

3、ding-PCR等克隆技術(shù)的進(jìn)一步發(fā)展與不斷完善，推進(jìn)了啟動(dòng)子的克隆進(jìn)程。近些年來(lái)，許多國(guó)家已經(jīng)開(kāi)始對(duì)棉花的基因組進(jìn)行測(cè)序，隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展與創(chuàng)新，克隆技術(shù)也有了很大的改變與發(fā)現(xiàn)，已經(jīng)成功的大量克隆并測(cè)序了許多棉花的啟動(dòng)子并且對(duì)這些啟動(dòng)子的結(jié)構(gòu)和功能也有了一定的了解。在對(duì)棉花基因啟動(dòng)子的研究中，除了利用外源的啟動(dòng)子以外，有更多的棉花內(nèi)源啟動(dòng)子已經(jīng)被開(kāi)發(fā)出來(lái)，利用棉花內(nèi)源啟動(dòng)子本身的特性來(lái)改良基因在棉花中的表達(dá)。
　　花棉花G

4、hFTL1基因已經(jīng)被克隆，系統(tǒng)進(jìn)化分析表明GhFTL1屬于FT亞家族成員，是開(kāi)花相關(guān)的調(diào)控基因，為了了解該基因的表達(dá)模式，通過(guò)染色體步移的方法從棉花基因組中分離到了GhFTL1基因的啟動(dòng)子。
　　目的：為了克隆棉花成花素同源基因GhFTL1的啟動(dòng)子，并且對(duì)已獲得的啟動(dòng)子片段進(jìn)行序列分析，從而進(jìn)一步對(duì)該啟動(dòng)子進(jìn)行功能初步分析。
　　方法：以新陸早33號(hào)棉花基因組DNA為模板，通過(guò)染色體步移的從棉花基因組中分離GhFTL1基因的

5、啟動(dòng)子。構(gòu)建帶有GUS報(bào)告基因和啟動(dòng)子與GhFTL1相連的載體，明確該啟動(dòng)子在植物中的定位，并且對(duì)轉(zhuǎn)基因擬南芥進(jìn)行形態(tài)觀(guān)測(cè)。
　　結(jié)果：首次利用染色體歩移技術(shù)從棉花基因組中分離了GhFTL1基因的啟動(dòng)子，通過(guò)分析該啟動(dòng)子片段，該啟動(dòng)子具有一般啟動(dòng)子的基本元件，另外還有一些其他元件。通過(guò)GUS報(bào)告基因的定位，該基因在成熟的葉片中有表達(dá)，在其它部位沒(méi)有表達(dá)。為進(jìn)一步研究其功能提供了基礎(chǔ)。
　　結(jié)論：雖然已克隆了該啟動(dòng)子片段，并且