黑龍骨的組織培養(yǎng)與遺傳特性研究.pdf

1、黑龍骨(Periploca forrestii Schlt)為蘿藦科杠柳屬植物,是云貴高原廣泛應(yīng)用于治療閉合性軟組織損傷、風(fēng)濕與類風(fēng)濕等疾病的民族藥植物,現(xiàn)己開發(fā)出多種商品成藥。貴州稱其為黑骨藤、云南稱其為滇杠柳。本文利用植物組織培養(yǎng)技術(shù),將黑龍骨莖段和頂芽插入含有不同濃度6-BA、NAA和2.4-D的MS培養(yǎng)基中人工培養(yǎng),誘導(dǎo)其成為完整植株為其人工繁殖提供指導(dǎo);以西南地區(qū)不同種源的11個(gè)野生黑龍骨和4個(gè)青蛇藤樣本為試材,通過40對SR

2、AP引物組合的PCR共得到420條擴(kuò)增條帶,利用NTSYS-pc2.1軟件對所擴(kuò)增條帶進(jìn)行分析并計(jì)算Jaccard's遺傳相似系數(shù)和遺傳距離,UPGMA法繪制聚類圖,研究該資源的遺傳結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。
　　 得到如下研究結(jié)果:
　　 ①滇杠柳頂芽誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA1.0 mg/L+NAA0.3 mg/L,其中芽的誘導(dǎo)率可達(dá)到86.29%;莖段誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA2.0 mg/L+NAA0.5 mg/L,

3、腋芽的萌發(fā)誘導(dǎo)率可達(dá)到56.67%;
　　 ②滇杠柳增殖的最佳培養(yǎng)基配方都為MS+6-BA2.0 mg/L+NAA0.1 mg/L,增殖系數(shù)達(dá)到2.10;生根培養(yǎng)基最好為1/2 MS+IBA0.5 mg/L,生根率達(dá)到53.33%。
　　 ③所選材料之間的多態(tài)性比率為79.28%,遺傳距離變化范圍0.040-1.613,平均0.840,遺傳相似系數(shù)在0.391-0.973之間變化,平均0.718,充分說明其遺傳多樣性較豐

4、富,各樣本之間存在遺傳差異。
　　 ④SRAP標(biāo)記適用于黑龍骨種質(zhì)的遺傳多樣性研究。試驗(yàn)SRAP譜顯示黑龍骨依據(jù)不同地區(qū)各自聚類,揭示了產(chǎn)地與種質(zhì)資源類群的聯(lián)系。陰陽坡樣本之間無明顯差異,海拔高度的影響較明顯,遺傳距離與空間距離存在著一定程度上的相關(guān)性。
　　 ⑤從DNA水平驗(yàn)證了滇杠柳和黑古藤同物異名,都是中藥材黑龍骨的原藥植物,民間被用作黑龍骨替代品的青蛇藤與黑龍骨遺傳距離較遠(yuǎn),為保證該藥的安全性和有效性,建議盡量以